硫化氢对鱼藤酮诱导的小胶质细胞活化及致炎因子生成的调节及机制研究

发布时间：2022-01-20 16:27

　　目的：研究硫化氢（Hydrogen sulfide, H₂S）对鱼藤酮诱导的BV2小胶质细胞活化及炎症因子生成的调节作用，并探讨其相关机制。方法：以BV2细胞和原代培养的皮层小胶质细胞为研究对象，采用鱼藤酮建立细胞炎症模型。采用免疫荧光方法检测小胶质细胞活化的特异性标记物Iba-1的表达；实时荧光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction, Q-PCR）检测小胶质细胞表面标记物CD68及YM1/2的表达；MTT比色法检测细胞活力；采用逆转录PCR（ReverseTranscription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）方法检测炎症相关蛋白环氧化酶-2（cyclooxygenase-2, COX-2）、白细胞介素（Interleukin, IL）-1βmRNA水平的变化；用活性氧族物质（Reactive oxygen species, ROS）探针-双氢乙酰乙酸-二氯荧光黄（Dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA）测定细胞内ROS含量；采用West... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

NaHS对小胶质细胞激活的影响

图 1. NaHS 对小胶质细胞激活的影响。（图 1-A. MTT 测定各组的细胞凋亡率；图 1-B. 免疫荧光显微镜观察 NaHS (100 μM, 5 min)对鱼藤酮诱导(10 nM, 24 h)的 BV2 细胞中 Iba-1 的表达变化的影响，绿色荧光代表 Iba-1，蓝色荧光代表细胞核，标尺示 37.5 μm；图 1-C, D. Real time PCR 检测 NaHS 对 CD68（C）及 Ym1/2（D）基因转录水平的影响，与对照组相比，**P<0.01；与鱼藤酮组相比，##P<0.01，###P<0.001。n=4-5）2. NaHS 预处理对鱼藤酮诱导的促炎因子表达和生成的影响在上述结果基础上，我们进一步检测了NaHS对鱼藤酮诱导的相关炎症因子如COX-2, IL-1β及PGE2产生的影响。如图所示，鱼藤酮处理后18 h和24 h，BV2细胞中COX-2的mRNA及蛋白水平显著升高（图2-A、B），48h后细胞培养上清中PGE2水平明显增加（图2-C）；NaHS (100 μM)预处理5 min能够抑制COX-2mRNA和蛋白，以及PGE2的升高。与COX-2相似的是，鱼藤酮处理细胞18 h后，IL-1 的转录水平也较对照组升高，而用NaHS预处理5 min后能够抑制其升高（图2-D）。此外，NaHS(100 μM)预处理也

图 2. NaHS 对鱼藤酮诱导的炎症相关因子产生的影响。（图 2-A, B. RT-PCR 及 werstern blot 检测 NaHS(100 μM, 5 min)对鱼藤酮(10 nM)诱导的 COX-2 转录(A)和蛋白表达(B)的影响；图2-C. ELISA检测NaHS对鱼藤酮(10 nM, 48 h)诱导的PGE2的影响；图 2-D. RT-PCR 检测 NaHS 对鱼藤酮(10 nM, 18 h)诱导的 IL-1β转录的影响；图 2-E. DCF 法检测NaHS 对鱼藤酮(10 nM, 18 h)诱导的 ROS 蓄积的影响；图 2-F. ELISA 检测 NaHS 对鱼藤酮(10 nM,48 h)诱导的原代小胶质细胞 PGE2产生的影响，与对照组相比，**P<0.01，***P<0.001；与鱼藤酮组相比，##P<0.01，#P<0.05。n=3）3. NaHS 后处理对鱼藤酮诱导的 COX-2 表达的影响鉴于神经炎症常存在于疾病的发生或发展中，所以我们也评价了鱼藤酮处理后再给予外源性 H2S 的作用。分别在鱼藤酮处理 BV2 细胞 0 h、1 h、6 h 及 12 h 后， 加入 NaHS(100 μM)，24h 后提取蛋白分析 COX-2 蛋白表达变化 。Western blott 结果显示，鱼藤酮处理 24 h 后， BV2 细胞 COX-2 的蛋白水平显著升高，而在鱼藤酮给药

【参考文献】：
期刊论文
[1]“废气不废”:气体信号分子硫化氢的研究进展[J]. 金红芳,杜军保,唐朝枢.  生理学报. 2010(06)



本文编号：3599152