CUX-1在胶质瘤中的表达及其对肿瘤增殖和预后的意义
发布时间：2022-01-23 18:44
目的:脑胶质瘤是目前最常见的侵袭性颅内原发恶性肿瘤,鉴于其高侵袭、高复发的特性,目前胶质瘤患者的中位生存期约为14.6个月,5年生存率仅为5.5%,严重影响着人类的生活质量和健康。转录调节因子CUX-1为同源异型盒homeobox家族的成员之一,其在大脑皮层上层表达,参与DNA复制、细胞周期控制和DNA修复。目前已有多种研究证明CUX-1参与了多种类型实体肿瘤的增殖。本研究旨在探讨转录因子CUX1在胶质瘤中的表达及其与临床病理和患者预后的关系,并初步预测其在胶质瘤增殖中介导的相关分子机制。方法:运用生物信息学分析方法在肿瘤基因组图谱数据库（TCGA）中对转录因子CUX-1进行基因差异性表达分析及生存曲线分析。收集于2014年6月至2016年6月之间在山东省临沂市人民医院神经外科经手术切除并经病理诊断定级的不同级别胶质瘤组织46例,以及通过颅脑外伤脑叶切除减压术获得的正常脑组织10例,随访所有患者,获得完整病历资料。培养多株胶质瘤细胞系（U251,SF295,CRT,A172,TJ905）及正常胶质细胞系（HA1800）,qRT-PCR,Westernblot实验检测转录因子CUX1在胶...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
生物信息学分析CUX-1在数据库中的表达及生存分析
实验结果10实验结果1.TCGA数据库中转录因子CUX-1基因差异性表达分析及生存分析首先，为了明确转录因子CUX-1的表达与胶质瘤发生发展及患者临床预后的关系，我们在TCGA数据库中运用ULCAN在线生物信息学分析工具，对156例胶质瘤组织及5例正常脑组织中的CUX-1表达进行基因差异性分析。随后对39例CUX-1高表达及113例CUX-1低表达的胶质瘤患者进行Kaplan-Meie生存分析。结果表明，转录因子CUX-1在胶质瘤中表达明显升高，且高CUX-1表达明显缩短胶质瘤患者总体生存期（P<0.05）。（图1a，b）图1.生物信息学分析CUX-1在数据库中的表达及生存分析。图1a.不同胶质瘤组织中CUX-1的差异表达分析。图1b.Kaplan-Meier生存曲线（低表达，N＝113；高表达，N＝39，P＝0.03）。上述数据均来自TCGA数据库及GTEX数据库。2.CUX-1在胶质瘤组织及细胞系中的表达首先我们将8例不同WHO分级的胶质瘤组织样本（WHOⅠ～Ⅱ级4例；WHOⅢ～Ⅳ级4例）及1例正常脑组织样本进行组织匀浆，提取组织蛋白，随后进行实时荧光定量PCR实验（qRT-PCR）及蛋白印迹实验（Westernblot）。qRT-PCR实验结果表明，CUX-1mRNA在胶质瘤中的表达较正常脑组织明显升高，且在高级别胶质瘤（HGG，WHOⅢ～Ⅳ级）中的表达明显高于低级别胶质瘤（LGG，WHOⅠ～Ⅱ级）中的表达，
青岛大学硕士学位论文11提示转录因子CUX-1在胶质瘤组织RNA层面上的表达且随胶质瘤WHO分级的升高而而上调（P<0.01）；Westernblot实验结果表明，转录因子CUX-1在胶质瘤组织中的表达相较正常脑组织而言明显升高（P<0.05），且高级别胶质瘤（WHOⅢ～Ⅳ级）中的表达显著高于低级别胶质瘤（WHOⅠ～Ⅱ级）中的表达（P<0.01），说明在胶质瘤组织蛋白层面上CUX-1的表达水平同样随着胶质瘤WHO级别的升高而上调（图2a,2b）。随后我们培养了3株胶质瘤细胞系（U251，SF295，CRT）、2株胶质母细胞瘤（GBM）细胞系（A172，TJ905）以及1株正常星形胶质细胞系（HA1800），对其进行细胞匀浆，提取细胞蛋白。qRT-PCR实验结果表明CUX-1mRNA在胶质瘤细胞系中（SF295，CRT，A172，TJ905）的表达较正常胶质细胞系（HA1800）明显升高，且在胶母细胞系（A172，TJ905）中的表达较胶质瘤细胞系（SF295，CRT）中的表达更高（P<0.01），提示CUX-1在细胞RNA层面上的表达随胶质瘤细胞的恶性程度增加而明显上调；同样地，Westernblot实验结果表明，在细胞蛋白层面，转录因子CUX-1在胶质瘤细胞（SF295，A172，TJ905）中的表达相较正常胶质细胞（HA1800）而言升高，且在胶质母细胞瘤细胞系（A172，TJ905）中的表达显著其他细胞系（P<0.05），说明CUX-1在胶质瘤细胞蛋白层面上的表达水平同样随着胶质瘤恶性程度的升高而上调（图2c,2d）。图2.CUX-1在胶质瘤中高表达。图2a.qRT-PCR检测CUX-1mRNA在胶质瘤中的表达。与正常脑组织相比，CUX-1mRNA在胶质瘤组织中高表达，且随着WHO分级升高而上调；图2b.WHOⅠ～Ⅳ级胶质瘤及非肿瘤标本中CUX-1蛋白的Westernblot分析。图2c.qRT-PCR检测CUX-1mRNA在
本文编号：3604955
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
生物信息学分析CUX-1在数据库中的表达及生存分析
实验结果10实验结果1.TCGA数据库中转录因子CUX-1基因差异性表达分析及生存分析首先，为了明确转录因子CUX-1的表达与胶质瘤发生发展及患者临床预后的关系，我们在TCGA数据库中运用ULCAN在线生物信息学分析工具，对156例胶质瘤组织及5例正常脑组织中的CUX-1表达进行基因差异性分析。随后对39例CUX-1高表达及113例CUX-1低表达的胶质瘤患者进行Kaplan-Meie生存分析。结果表明，转录因子CUX-1在胶质瘤中表达明显升高，且高CUX-1表达明显缩短胶质瘤患者总体生存期（P<0.05）。（图1a，b）图1.生物信息学分析CUX-1在数据库中的表达及生存分析。图1a.不同胶质瘤组织中CUX-1的差异表达分析。图1b.Kaplan-Meier生存曲线（低表达，N＝113；高表达，N＝39，P＝0.03）。上述数据均来自TCGA数据库及GTEX数据库。2.CUX-1在胶质瘤组织及细胞系中的表达首先我们将8例不同WHO分级的胶质瘤组织样本（WHOⅠ～Ⅱ级4例；WHOⅢ～Ⅳ级4例）及1例正常脑组织样本进行组织匀浆，提取组织蛋白，随后进行实时荧光定量PCR实验（qRT-PCR）及蛋白印迹实验（Westernblot）。qRT-PCR实验结果表明，CUX-1mRNA在胶质瘤中的表达较正常脑组织明显升高，且在高级别胶质瘤（HGG，WHOⅢ～Ⅳ级）中的表达明显高于低级别胶质瘤（LGG，WHOⅠ～Ⅱ级）中的表达，
青岛大学硕士学位论文11提示转录因子CUX-1在胶质瘤组织RNA层面上的表达且随胶质瘤WHO分级的升高而而上调（P<0.01）；Westernblot实验结果表明，转录因子CUX-1在胶质瘤组织中的表达相较正常脑组织而言明显升高（P<0.05），且高级别胶质瘤（WHOⅢ～Ⅳ级）中的表达显著高于低级别胶质瘤（WHOⅠ～Ⅱ级）中的表达（P<0.01），说明在胶质瘤组织蛋白层面上CUX-1的表达水平同样随着胶质瘤WHO级别的升高而上调（图2a,2b）。随后我们培养了3株胶质瘤细胞系（U251，SF295，CRT）、2株胶质母细胞瘤（GBM）细胞系（A172，TJ905）以及1株正常星形胶质细胞系（HA1800），对其进行细胞匀浆，提取细胞蛋白。qRT-PCR实验结果表明CUX-1mRNA在胶质瘤细胞系中（SF295，CRT，A172，TJ905）的表达较正常胶质细胞系（HA1800）明显升高，且在胶母细胞系（A172，TJ905）中的表达较胶质瘤细胞系（SF295，CRT）中的表达更高（P<0.01），提示CUX-1在细胞RNA层面上的表达随胶质瘤细胞的恶性程度增加而明显上调；同样地，Westernblot实验结果表明，在细胞蛋白层面，转录因子CUX-1在胶质瘤细胞（SF295，A172，TJ905）中的表达相较正常胶质细胞（HA1800）而言升高，且在胶质母细胞瘤细胞系（A172，TJ905）中的表达显著其他细胞系（P<0.05），说明CUX-1在胶质瘤细胞蛋白层面上的表达水平同样随着胶质瘤恶性程度的升高而上调（图2c,2d）。图2.CUX-1在胶质瘤中高表达。图2a.qRT-PCR检测CUX-1mRNA在胶质瘤中的表达。与正常脑组织相比，CUX-1mRNA在胶质瘤组织中高表达，且随着WHO分级升高而上调；图2b.WHOⅠ～Ⅳ级胶质瘤及非肿瘤标本中CUX-1蛋白的Westernblot分析。图2c.qRT-PCR检测CUX-1mRNA在
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