脑胶质瘤细胞中ATF4在内质网应激诱导线粒体未折叠蛋白反应的作用机制研究

发布时间：2022-01-24 06:05

　　目的:本研究通过探讨脑胶质瘤细胞中内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）下,ATF4对线粒体未折叠蛋白反应(Mitochondria unfolded protein response,UPR^mt)的影响,揭示肿瘤细胞中ERS与UPR^mt之间的关系,并为干预细胞器交互作用治疗肿瘤提供有意义的线索。方法:本研究选择人脑胶质瘤细胞U87和SHG44细胞系作为研究对象,通过ERS诱导剂衣霉素（Tunicamycin,Tm）和毒胡萝卜素（Thapsigargin,Tg）诱导脑胶质瘤细胞产生ERS,采用基因干涉手段过表达或敲减ATF4的表达运用western blots、RT-qPCR、流式细胞术和mitotracker染色等分子生物学实验技术检测UPR^mt相关蛋白、线粒体DNA（Mitochondrial DNA,mtDNA）拷贝数、线粒体膜电势、线粒体形态和数量变化。结果:1.ERS能诱导脑胶质瘤细胞线粒体功能损伤。使用ERS诱导剂Tm、Tg处理脑胶质瘤SHG44与U87细胞构建ERS细... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

脑胶质瘤细胞ERS模型构建A.MTT检测U87和SHG44细胞Tm及Tg处理24h后细胞活力；B.

-26-体膜电势明显下降（图2C）。基于以上结果，可证明ERS可诱导线粒体功能失调，并且低浓度处理下，细胞存在一定的保护机制，保障线粒体功能，而随着药物浓度加大，线粒体功能明显受损。图2ERS诱导脑胶质瘤细胞线粒体功能损伤。A.mitotracker染色分析Tm处理12h后的SHG44细胞线粒体数量形态；B.RT-qPCR检测U87和SHG44细胞Tm处理12h后mtDNA拷贝数变化；C.流式细胞术检测SHG44细胞Tm处理24h后线粒体膜电势变化。与con相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

-28-图3ERS能诱导脑胶质瘤细胞产生UPRmtA.westernblots检测Tm、Tg处理U87细胞6、12h总蛋白中UPRmt指标变化；B.westernblots检测Tm、Tg处理SHG44细胞6、12h线粒体总蛋白UPRmt指标变化；C.RT-qPCR检测Tm处理U87、


本文编号：3606008