应用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统核糖核蛋白复合物技术基因修正威尔森氏症的体外研究

发布时间：2022-01-27 03:39

　　目的应用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统（CRISPR/Cas9）体外实验研究修正威尔森氏症（WD）基因。方法选用来源于DL近交系小鼠的Toxic milk小鼠（购自美国Jackson Laboratory公司）作WD模型,设计3个CRISPR来源的RNA （crRNA）-crRNA001/002/003,应用CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物（RNP）方法转染WD肝细胞,48 h后提取基因组DNA,聚合酶链反应（PCR）后测序检测基因编辑效率,筛选出效率最高者crRNA001,并设计相应的单链寡核苷酸（ssODN）修复模板;用crRNA001和ssODN共转染肝细胞,模板特异性引物行PCR,验证ssODN掺入。组间比较采用Student’St检验。结果 Sanger测序结果显示,crRNA001的编辑效率为（57.8±5.1）%。用ssODN共转染细胞后,模板特异性引物行PCR,能扩增出修正后的铜离子转运ATP酶β肽（ATP7B）基因条带;二代测序结果显示,ATP7B基因修复效率为（7.45±2.54）%。结论 CRISPR/Cas9 RNP转染能达到较高编辑效率,... 

【文章来源】：中华实验外科杂志. 2020,37(12)北大核心CSCD

【文章页数】：3 页


本文编号：3611686