miR-223靶向抑制PAX6调控脑胶质瘤细胞的生长和侵袭研究
发布时间：2022-02-09 09:51
脑胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤,因它具有独特的侵袭性而难以治疗,因此寻找脑胶质瘤新的治疗靶点具有重要意义。近年来研究表明,肿瘤抑制因子PAX6在胶质瘤的发生发展过程中是一种抑制性调控因素,它的高表达能抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭,但PAX6在胶质瘤的表达水平明显低于邻近正常组织,提示探索胶质瘤中PAX6表达降低的确切机制,有望为明确胶质瘤的侵袭性指明新思路。miRNAs属于一类小的、非编码的单链RNAs,它可以通过与靶基因mRNA的3’-UTR结合,引起靶基因mRNA降解或翻译受阻,从而在转录后水平调节蛋白的表达。miRNAs具有多种生物学作用,研究表明miRNAs的异常表达在肿瘤的发生和进展中起重要作用,miRNAs作为抑癌基因还是致癌基因取决于它们相关靶基因的功能。在不同类型的肿瘤细胞中miR-223通过靶向不同的功能基因而表现出不同的作用。胶质瘤的生长和转移与不同的miRNAs有关,然而在脑胶质瘤中miR-223的生物学功能目前还不清楚。此外,与PAX6相关的miRNAs的报道非常少见,在脑胶质瘤中,miR-223是否可以靶向作用于PAX6需要进一步证实。本研究中,我...
【文章来源】：中南大学湖南省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PAX6在正常胚脑组织和脑胶质瘤组织中的表达（100X)
博士学位论文 第一章脑胶质瘤组织和细胞中miR-223、PAX6的差异性表达及IE向关图1-2 PAX6蛋白的相对表达量注：**:与Nomal组比较，p<0.01； ★:与T1组比较，p<0.05;“：与T2组较，/7<0.01。另外6例TM分期不明确。1.3.2 脑胶质瘤细胞(A172、1)251、U373、U138、XB1330)与胚脑胶质细胞（HFGC中PAX6 mRNA和miR-223的表达1.3.2.1脑胶质瘤细胞与正常脑胶质细胞总RNA检测的琼脂糖凝胶电泳结果分别取6种细胞的总RNA各1 hL样品进行变性琼脂糖凝胶电泳，约20 mi后于紫外成像仪上进行观察并拍照。如图1-3所示，RNA样品的28S，18S条清晰，上样孔中无残留。应用分光光度计进一步测定RNA样品的纯度，结果示OD260与OD280比值均在1.9-2.1之间，表明RNA样品质量完全符合实验求。HFGC A172 U251 U373 U138 XB1330
图1-6 PAX6在脑胶质瘤细胞中的相对表达量注：与 HFGC 组比较，’；7<0.05，p<0.01, ><0.0011.3.2.3 qRT-PCR检测脑胶质瘤细胞miR-223的表达结果qRT-PCR是目前miRNA定量检测比较简便而又常用的方法，本课题运用qRT-PCR检测脑胶质瘤细胞系中miR-223的表达，以U6作为内参照，从反应后扩增曲线及馆解曲线可以看出PCR的产物量足够且比较单一（图1-7,图1-8)。结果显示，miR-223在脑胶质瘤细胞中均有表达，与正常胚脑胶质细胞HFGC相比较，各胶质瘤细胞中miR-223的表达均明显上调，其中miR-223的表达量以在U138、XB1330细胞中的表达最高（；7<0.001)，在U251、U373细胞中的表达居中（pO.Ol)，在A172细胞中的表达较高（/7<0.05)(图1-9)。f '.… ‘ ■ ““一一―丨二丄t ?>?? T ‘ ‘ ‘ 一二丨■______■_? ■ S； ::iJ// ■ \ ‘^ . "?隱■丨……丨■■■■■_ir "- atm.o ? Kv?3s:9( ws( nr -H tc- 供 於 a?8 >1^*11? t
本文编号：3616794
【文章来源】：中南大学湖南省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PAX6在正常胚脑组织和脑胶质瘤组织中的表达（100X)
博士学位论文 第一章脑胶质瘤组织和细胞中miR-223、PAX6的差异性表达及IE向关图1-2 PAX6蛋白的相对表达量注：**:与Nomal组比较，p<0.01； ★:与T1组比较，p<0.05;“：与T2组较，/7<0.01。另外6例TM分期不明确。1.3.2 脑胶质瘤细胞(A172、1)251、U373、U138、XB1330)与胚脑胶质细胞（HFGC中PAX6 mRNA和miR-223的表达1.3.2.1脑胶质瘤细胞与正常脑胶质细胞总RNA检测的琼脂糖凝胶电泳结果分别取6种细胞的总RNA各1 hL样品进行变性琼脂糖凝胶电泳，约20 mi后于紫外成像仪上进行观察并拍照。如图1-3所示，RNA样品的28S，18S条清晰，上样孔中无残留。应用分光光度计进一步测定RNA样品的纯度，结果示OD260与OD280比值均在1.9-2.1之间，表明RNA样品质量完全符合实验求。HFGC A172 U251 U373 U138 XB1330
图1-6 PAX6在脑胶质瘤细胞中的相对表达量注：与 HFGC 组比较，’；7<0.05，p<0.01, ><0.0011.3.2.3 qRT-PCR检测脑胶质瘤细胞miR-223的表达结果qRT-PCR是目前miRNA定量检测比较简便而又常用的方法，本课题运用qRT-PCR检测脑胶质瘤细胞系中miR-223的表达，以U6作为内参照，从反应后扩增曲线及馆解曲线可以看出PCR的产物量足够且比较单一（图1-7,图1-8)。结果显示，miR-223在脑胶质瘤细胞中均有表达，与正常胚脑胶质细胞HFGC相比较，各胶质瘤细胞中miR-223的表达均明显上调，其中miR-223的表达量以在U138、XB1330细胞中的表达最高（；7<0.001)，在U251、U373细胞中的表达居中（pO.Ol)，在A172细胞中的表达较高（/7<0.05)(图1-9)。f '.… ‘ ■ ““一一―丨二丄t ?>?? T ‘ ‘ ‘ 一二丨■______■_? ■ S； ::iJ// ■ \ ‘^ . "?隱■丨……丨■■■■■_ir "- atm.o ? Kv?3s:9( ws( nr -H tc- 供 於 a?8 >1^*11? t
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