大鼠自体i-PRF联合BMSCs治疗坐骨神经损伤的实验研究
发布时间：2022-02-09 18:03
目的:通过体内及体外实验探讨注射型富血小板纤维蛋白（i-PRF）诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）成神经细胞分化的能力及二者联合使用治疗坐骨神经损伤的疗效。方法:取10-15日龄SD乳鼠胫骨骨髓分离培养BMSCs至第4代后随机分为对照组（A组）及实验组（B、C组）。采用改良低速离心法备制i-PRF后分别取0、100、200ul加入各组12%FBS完全培养基中与BMSCs共培养,2周后i-PRF及血清浓度降低各50%。第7、14、21d观察各组细胞形态改变并以免疫组化法及Western blot检测其诱导结果。取成年SD大鼠24只采用钳夹法备制坐骨神经损伤模型后随机分为四组,A组鞘膜内注射BMSCs悬液+i-PRF;B组鞘膜内注射i-PRF;C组鞘膜内注射BMSCs悬液;D组鞘膜内注射生理盐水,每组6只。术后每周对各组大鼠进行BBB功能评分;术后2个月采用脱颈法处死大鼠取坐骨神经组织行透射电镜及HE染色观察神经修复情况;Western blot技术检测相关蛋白表达。结果:BMSCs经i-PRF诱导7天后细胞形态开始改变,21天后突触生长,出现类神经元细胞形态;细胞免疫组化显示:B、C组N...
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光学显微镜观察第四代BMSCsa.倒置相差显微镜×100；b.倒置相差显微镜×200
-14-结果1i-PRF体外诱导BMSCs成神经干细胞分化实验1.1大鼠BMSCs培养结果依照本课题组既往使用的密度梯度离心法进行细胞分离及培养及传代。在培养开始后3周可以获得纯化的第4代BMSCs群。见图1。图1光学显微镜观察第四代BMSCsa.倒置相差显微镜×100；b.倒置相差显微镜×200Fig.1Observationoffourth-generationBMSCsbyopticalmicroscopea.Invertedphasecontrastmicroscope×100;b.Invertedphasecontrastmicroscope×2001.2i-PRF的备制结果依照Choukroun等改良低速离心法成功备制实验所需i-PRF。见图2。图2低速离心法备制i-PRFa.离心前；b.离心后Fig.2Preparationofi-PRFbylowspeedcentrifugationa.Beforecentrifugation;b.Aftercentrifugation
-15-1.3光镜及结晶紫染色观察结果实验组细胞经i-PRF诱导7天后细胞胞体逐渐变圆，少量细胞突触生长；14天后大量细胞突触呈放射样生长，胞体呈圆形改变；21天后出现呈双极或多极改变，突触变长。对照组细胞形态仍呈纺锤形、多角形，未见明显变化。诱导结束后行结晶紫染色，实验组细胞胞体圆形，四周见放射状长突触，对照组较前无明显改变。见图3。图3细胞形态学观察（×200）a.诱导前；b.实验组诱导后7d；c.实验组诱导后14d；d.实验组诱导后21d；e.对照组21d后结晶紫染色；f.实验组21d后结晶紫染色Fig.3Morphologicalobservationofcells(×200)a.Beforeinduction;b.Experimentalgroup7days;c.Experimentalgroup14days;d.Experimentalgroup21days;e.Crystalvioletstainingafter21daysinthecontrolgroup;f.Crystalvioletstainingafter21dinexperimentalgroup1.4免疫组织化学染色检测结果在实验组中，Nestind抗原在胞体及突触表达呈阳性；而对照组中，细胞Nestind抗原表达呈弱阳性或阴性。见图4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]电针治疗周围神经损伤后损伤局部差异表达基因分析[J]. 车文文,郭永明,王丹,赵舒蒙,郭义,章明星. 天津中医药大学学报. 2019(06)
[2]PLGA微球搭载鹿茸多肽联合BMSCs移植对坐骨神经损伤修复的作用及机制研究[J]. 龚庆,宋秋莹,邱莉晶,黄晓巍,赵文海. 中药新药与临床药理. 2019(11)
[3]间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用现状及前景分析[J]. 曹丽芝,冯乃波,王娟,陈嘉峰. 中国组织工程研究. 2019(33)
[4]组织工程周围神经血管化研究进展[J]. 赵斌,马剑雄,马信龙. 中国修复重建外科杂志. 2019(08)
[5]骨髓间充质干细胞移植治疗双侧盆神经损伤大鼠排尿功能障碍的初步研究[J]. 沈洲,葛庆宇,夏开国,林垚,宣强,肖峻. 临床泌尿外科杂志. 2019(05)
[6]骨髓间充质干细胞移植对周围神经损伤后施旺细胞的影响[J]. 邱超,郑亚妮,许硕贵. 组织工程与重建外科杂志. 2018(01)
[7]骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究[J]. 孙超,朱伟东,柳靖,姜华,陈明,张晓毅. 中华男科学杂志. 2017(05)
[8]Evolution,current status and advances in application of platelet concentrate in periodontics and implantology[J]. Amit Arvind Agrawal. World Journal of Clinical Cases. 2017(05)
[9]牵拉损伤对大鼠坐骨神经影响的实验研究[J]. 童昌军,魏优秀,黄康. 创伤外科杂志. 2017(01)
[10]应用自体富血小板血浆治疗慢性难愈性创面的实验研究[J]. 李明,章军辉,李淑敏,狄正林,何志勇,贾伟涛,袁霆,张长青. 中华关节外科杂志(电子版). 2016(06)
硕士论文
[1]不同浓度富血小板血浆（PRP）促进人骨髓间充质干细胞增殖和成脂成骨分化的实验研究[D]. 王克涛.中国人民解放军医学院 2017
[2]补肾活血法联合PRP对股骨颈骨折愈合的临床研究[D]. 姚五平.福建中医药大学 2014
[3]hNT-4基因修饰嗅鞘细胞结合组织工程技术治疗周围神经损伤的研究[D]. 李志辉.内蒙古科技大学包头医学院 2012
本文编号：3617431
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光学显微镜观察第四代BMSCsa.倒置相差显微镜×100；b.倒置相差显微镜×200
-14-结果1i-PRF体外诱导BMSCs成神经干细胞分化实验1.1大鼠BMSCs培养结果依照本课题组既往使用的密度梯度离心法进行细胞分离及培养及传代。在培养开始后3周可以获得纯化的第4代BMSCs群。见图1。图1光学显微镜观察第四代BMSCsa.倒置相差显微镜×100；b.倒置相差显微镜×200Fig.1Observationoffourth-generationBMSCsbyopticalmicroscopea.Invertedphasecontrastmicroscope×100;b.Invertedphasecontrastmicroscope×2001.2i-PRF的备制结果依照Choukroun等改良低速离心法成功备制实验所需i-PRF。见图2。图2低速离心法备制i-PRFa.离心前；b.离心后Fig.2Preparationofi-PRFbylowspeedcentrifugationa.Beforecentrifugation;b.Aftercentrifugation
-15-1.3光镜及结晶紫染色观察结果实验组细胞经i-PRF诱导7天后细胞胞体逐渐变圆，少量细胞突触生长；14天后大量细胞突触呈放射样生长，胞体呈圆形改变；21天后出现呈双极或多极改变，突触变长。对照组细胞形态仍呈纺锤形、多角形，未见明显变化。诱导结束后行结晶紫染色，实验组细胞胞体圆形，四周见放射状长突触，对照组较前无明显改变。见图3。图3细胞形态学观察（×200）a.诱导前；b.实验组诱导后7d；c.实验组诱导后14d；d.实验组诱导后21d；e.对照组21d后结晶紫染色；f.实验组21d后结晶紫染色Fig.3Morphologicalobservationofcells(×200)a.Beforeinduction;b.Experimentalgroup7days;c.Experimentalgroup14days;d.Experimentalgroup21days;e.Crystalvioletstainingafter21daysinthecontrolgroup;f.Crystalvioletstainingafter21dinexperimentalgroup1.4免疫组织化学染色检测结果在实验组中，Nestind抗原在胞体及突触表达呈阳性；而对照组中，细胞Nestind抗原表达呈弱阳性或阴性。见图4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]电针治疗周围神经损伤后损伤局部差异表达基因分析[J]. 车文文,郭永明,王丹,赵舒蒙,郭义,章明星. 天津中医药大学学报. 2019(06)
[2]PLGA微球搭载鹿茸多肽联合BMSCs移植对坐骨神经损伤修复的作用及机制研究[J]. 龚庆,宋秋莹,邱莉晶,黄晓巍,赵文海. 中药新药与临床药理. 2019(11)
[3]间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用现状及前景分析[J]. 曹丽芝,冯乃波,王娟,陈嘉峰. 中国组织工程研究. 2019(33)
[4]组织工程周围神经血管化研究进展[J]. 赵斌,马剑雄,马信龙. 中国修复重建外科杂志. 2019(08)
[5]骨髓间充质干细胞移植治疗双侧盆神经损伤大鼠排尿功能障碍的初步研究[J]. 沈洲,葛庆宇,夏开国,林垚,宣强,肖峻. 临床泌尿外科杂志. 2019(05)
[6]骨髓间充质干细胞移植对周围神经损伤后施旺细胞的影响[J]. 邱超,郑亚妮,许硕贵. 组织工程与重建外科杂志. 2018(01)
[7]骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究[J]. 孙超,朱伟东,柳靖,姜华,陈明,张晓毅. 中华男科学杂志. 2017(05)
[8]Evolution,current status and advances in application of platelet concentrate in periodontics and implantology[J]. Amit Arvind Agrawal. World Journal of Clinical Cases. 2017(05)
[9]牵拉损伤对大鼠坐骨神经影响的实验研究[J]. 童昌军,魏优秀,黄康. 创伤外科杂志. 2017(01)
[10]应用自体富血小板血浆治疗慢性难愈性创面的实验研究[J]. 李明,章军辉,李淑敏,狄正林,何志勇,贾伟涛,袁霆,张长青. 中华关节外科杂志(电子版). 2016(06)
硕士论文
[1]不同浓度富血小板血浆（PRP）促进人骨髓间充质干细胞增殖和成脂成骨分化的实验研究[D]. 王克涛.中国人民解放军医学院 2017
[2]补肾活血法联合PRP对股骨颈骨折愈合的临床研究[D]. 姚五平.福建中医药大学 2014
[3]hNT-4基因修饰嗅鞘细胞结合组织工程技术治疗周围神经损伤的研究[D]. 李志辉.内蒙古科技大学包头医学院 2012
本文编号：3617431
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