成体神经干细胞移植治疗大鼠脑出血实验研究

发布时间：2022-02-12 23:23

　　目的：评估成体神经干细胞移植治疗大鼠脑出血疗效,观察移植的成体神经干细胞在大鼠脑内分化方向。方法：①取成年大鼠海马齿状回,通过机械分离及胰酶消化法制备单细胞悬液；密度梯度离心及培养基选择法获取成体神经干细胞悬液；体外培养、鉴定及标记。②自体血纹状体注入法制作大鼠脑出血模型20只,选取LONGA评分相同的模型鼠10只,随机分为实验组（注入神经干细胞）和对照组（注入等量生理盐水）各5只,术后24小时,将体外培养并标记的大鼠成体神经干细胞通过立体定向脑实质移植法移植入大鼠脑内血肿周围。③术后每周,连续7周,采用旋转实验及肢体放置实验对大鼠进行行为学测试,以观察大鼠神经功能恢复状况；7周后行免疫组化检测移植的成体神经干细胞在实验组大鼠脑内的分化方向。结果：①成体神经干细胞在体外悬浮培养时逐渐成球生长,当克隆球直径达到160±10um时,部分成体神经干细胞开始长出突起,克隆球中央细胞因缺乏营养开始死亡,传至第三代时,细胞仍能保持较高的增殖能力。②自体血注入大鼠脑内纹状体后,大鼠出现明显脑出血症状及体征。③成体神经干细胞移植入大鼠脑血模型脑内后,实验组大鼠神经功能修复与对照组相比,存在显著差异（P... 

【文章来源】：中南大学湖南省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
英文缩略词表
1 绪论
2 材料与方法
    2.1 成体神经干细胞制备
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 成体神经干细胞鉴定
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 成体神经干细胞标记
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 脑出血模型制作
        2.4.1 材料
        2.4.2 方法
    2.5 成体神经干细胞移植
        2.5.1 材料
        2.5.2 方法
    2.6 大鼠行为学测试
        2.6.1 材料
        2.6.2 方法
    2.7 免疫组织化学染色检测
        2.7.1 材料
        2.7.2 方法
    2.8 统计学处理
3 实验结果
    3.1 成体神经干细胞制备结果
    3.2 脑出血模型制作结果
    3.3 成体神经干细胞移植术后大鼠行为学测试结果
    3.4 成体神经干细胞移植术后免疫组织化学染色结果
4 分析及讨论
    4.1 成体神经干细胞的制备探讨
        4.1.1 成体神经干细胞定位与分布
        4.1.2 成体神经干细胞分离、纯化探讨
        4.1.3 成体神经干细胞传代时机探讨
        4.1.4 成体神经干细胞鉴定及标记方法探讨
    4.2 脑出血模型制作方法探讨
    4.3 成体神经干细胞移植探讨
        4.3.1 移植时间点选择
        4.3.2 移植途径选择
        4.3.3 移植位点选择
    4.4 成体神经干细胞的功能
    4.5 成体神经干细胞移植术后大鼠行为学测试结果分析
    4.6 成体神经干细胞移植术后免疫组化结果分析
5 结论
6 展望
参考文献
综述
    References
附录
    附录A 海马分离步骤及图片
    附录B 成体神经干细胞培养方法
    附录C 脑出血模型制作图片
    附录D 成体神经干细胞移植图片
攻读学位期间论文发表与获奖
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]神经干细胞立体定向脑内移植治疗大鼠重型颅脑损伤[J]. 黎国雄,王传湄,龚利平,吴江,龚良庚,田洪涛.  中国临床神经外科杂志. 2009(05)
[2]成年大鼠脑出血后室管膜下区、血肿周围神经前体细胞增殖研究[J]. 孙建军,刘勇,张蓬勃,陈新林,郭振宇,张建水,杨蓬勃,师蔚.  南方医科大学学报. 2008(11)
[3]神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植与神经干细胞移植治疗实验性脑出血的比较[J]. 唐洲平,康慧聪,彭岚,朱遂强,雷霆,方思羽,张苏明.  中华神经科杂志. 2005(08)
[4]同种异体神经干细胞移植治疗大鼠脑内出血的研究[J]. 张朋奇,姜晓兵,朱贤立,赵甲山.  华中医学杂志. 2005(02)
[5]中枢神经系统不同部位来源的神经干细胞在体外生长特性的比较[J]. 许汉鹏,苟琳,杨浩,王春婷,吴玉梅,鞠躬.  解剖学报. 2004(04)



本文编号：3622572