中枢神经系统结核病中单核细胞—星型胶质细胞网络对金属基质蛋白酶9基因表达和分泌的调控

发布时间：2022-02-15 21:16

　　目的：结核性脑膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）是神经系统结核病中最常见的疾病，也是死亡率最高的肺外结核病。在中枢神经系统结核中，金属基质蛋白酶9（MMP-9）分泌增加，并发症和死亡与MMP-9含量有关。但目前对结核杆菌是如何引起中枢神经系统组织细胞的MMP-9过度表达分泌了解不多。本实验采用结核杆菌H37Rv感染人外周血单个核细胞后的条件培养基刺激人星型胶质瘤细胞系U251，了解结核性脑膜炎发病中脑组织主要细胞MMP-9的表达分泌特点，以及脑组织细胞在调控MMP-9分泌时的相互作用，以进一步了解结核性脑膜炎的发病机制。方法：六孔板按每孔1.0×10⁶接种U251细胞，待细胞贴壁后，予结核分枝杆菌H37Rv按MOI（感染复数，即细菌：细胞比例）=1、10和100直接感染72h后（M.tb组），收集细胞上清，Elisa法检测MMP-9含量，裂解细胞提取总RNA，RT-PCR检测MMP-9基因表达。密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（PBMCs）后，用RPMI-1640培养基稀释，接种六孔板（1.0×10⁶细胞/孔），... 

【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文对照表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料、主要试剂及仪器
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 引物序列
    2.2 实验方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 人淋巴细胞分离管分离分离外周血单个核细胞（PBMCs）
        2.2.3 结核杆菌 H37Rv 培养
        2.2.4 结核杆菌 H37Rv 刺激人单个核细胞获得条件培养基
        2.2.5 人神经胶质瘤细胞系 U251 培养
        2.2.6 实验分组
        2.2.7 ELISA 法检测细胞培养液上清中 MMP-9 含量
        2.2.8 流式细胞术检测细胞培养液上清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的含量
        2.2.9 明胶酶谱法检测细胞上清中 MMP-9 的活性
        2.2.10 RT-PCR 检测条件培养基刺激 U251 细胞 72h 后 MMP-9、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA 的表达
        2.2.11 Western blot 技术检测细胞上清中 MMP-9 蛋白、胞浆内参β-Actin 蛋白和胞核 NF-κB 蛋白表达水平
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1 人神经星型胶质瘤细胞系 U251 细胞培养
    3.2 Elisa 法检测细胞上清液中 MMP-9 的含量
    3.3 RT-PCR 检测 MMP-9 在细胞中的表达
    3.4 流式细胞术检测细胞上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的表达
    3.5 RT-PCR 检测炎性细胞因子表达
    3.6 明胶酶谱法检测细胞上清中 MMP-9 活性
    3.7 Western Blot 检测条件培养基刺激后 MMP-9 蛋白的表达水平
    3.8 Western Blot 检测胞核蛋白 NF- 表达水平
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]金属基质蛋白酶-9在中枢神经系统感染患者脑脊液中的表达水平及意义[J]. 李小鹏,张伦理,黄呈辉.  中华传染病杂志. 2012 (03)
[2]巨噬细胞的极化及其意义[J]. 张凤,熊思东.  细胞生物学杂志. 2007(01)



本文编号：3627281