新型组织工程神经体外构建、修复大鼠坐骨神经缺损效果的研究

发布时间：2022-04-28 20:31

　　目的通过系统研究周围神经横断损伤后免疫反应和神经再生的关系,在分子水平探讨促进周围神经再生的潜在靶向分子。为获得更好的修复效果,利用组织工程技术在体外构建新型组织工程神经修复大鼠周围神经缺损,综合评价其在神经修复方面的效果,以期在未来指导临床治疗神经损伤工作。方法利用基因芯片分析技术寻找与免疫反应和神经再生相关的差异表达基因,综合分析差异基因和调控蛋白质的交互网络关系,通过实时定量PCR和免疫组织化学染色验证差异基因。从幼年SD大鼠皮肤内分离、培养SKPs细胞,诱导分化为SKP-Neurons和SKP-SCs,利用SKP-Neurons和SKP-SCs与壳聚糖/丝素导管共培养来构建新型组织工程神经。构建的新型组织工程神经修复大鼠坐骨神经10 mm缺损。术后通过行为学、神经电生理、荧光金逆行示踪、神经和神经支配靶肌肉形态学等指标综合评价修复效果。结果1.基因分析验证:差异基因筛选结果显示有600多个基因和10个经典途径参与免疫反应,其中约60个基因参与神经再生的5个经典途径,分析并筛选出6个参与多途径的基因,它们被用来进行实时定量PCR和免疫组织化学染色验证。证明基因分析的准确性,筛选的... 

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 神经再生和免疫反应相关的分子机制研究
        1.1.1 Alcam
        1.1.2 Creb1
        1.1.3 Gli2
        1.1.4 Mid1
        1.1.5 Nedd4l
        1.1.6 Nfatc2
        1.1.7 Nrg1
        1.1.8 Nrp1和Nrp2
        1.1.9 Rac1
        1.1.10 Runx3
        1.1.11 Vax1
    1.2 皮肤源前体细胞(SKPs)在周围神经领域的应用
第2章 周围神经再生的分子机制研究
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 大鼠坐骨神经横断模型的制备
        2.2.5 样品RNA提取和放大、微阵列芯片杂交、芯片扫描
        2.2.6 生物信息学分析
        2.2.7 实时定量PCR(qRT-PCR)验证
        2.2.8 免疫组织化学验证
        2.2.9 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 坐骨神经横断后近端残端基因表达谱
        2.3.2 基因功能分析
        2.3.3 坐骨神经横断后免疫反应与轴突导向、生长的相关性分析
        2.3.4 转录调节因子的级联调节
        2.3.5 免疫反应和神经系统信号的经典通路富集分析
        2.3.6 差异基因实时定量PCR验证和免疫组织化学验证
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 新型组织工程神经体外构建及修复大鼠坐骨神经缺损的效果评价
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 皮肤源前体细胞(SKPs)的分离、培养
        3.2.4 SKPs分别向施万细胞和神经元分化培养
        3.2.5 培养、分化细胞的免疫细胞化学染色
        3.2.6 新型组织工程神经的体外构建
        3.2.7 新型组织工程神经的免疫细胞化学染色
        3.2.8 新型组织工程神经扫描电镜样本制备
        3.2.9 TEN修复大鼠10mm坐骨神经缺损模型制备
        3.2.10 CatWalk步态分析
        3.2.11 神经电生理检测
        3.2.12 荧光金(FG)逆行示踪检测
        3.2.13 动物模型灌注取材
        3.2.14 免疫组织化学染色
        3.2.15 透射电镜样本制备
        3.2.16 靶肌肉湿重测量
        3.2.17 肌肉马松(Masson)染色
        3.2.18 运动终板染色
        3.2.19 数据统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 SKPs、SKP-SCs和SKP-Neurons的分离、培养和鉴定
        3.3.2 新型组织工程神经的体外构建
        3.3.3 CatWalk步态分析
        3.3.4 神经电生理检测
        3.3.5 再生神经形态学研究
        3.3.6 荧光金逆行示踪
        3.3.7 再生神经靶肌肉研究
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 结论
参考文献
作者简介及在读期间科研成果
致谢



本文编号：3649479