注射用丹参多酚酸对急性局灶性脑梗死小鼠血脑屏障的保护作用及机制研究

发布时间：2017-05-14 16:11

本文关键词：注射用丹参多酚酸对急性局灶性脑梗死小鼠血脑屏障的保护作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:脑卒中是导致人类致残和致死的主要病因之一,其中以急性脑梗死最为常见。脑水肿是导致急性脑梗死后机体死亡的首因。大量血管内物质透过破坏的血脑屏障涌入脑实质,脑容量的急速膨胀导致了机体的死亡。氧化应激损伤血脑屏障,形成血管源性水肿的病理机制已被充分证明。急性脑梗死发生后,脑组织内积累大量的活性氧自由基,不仅直接攻击血脑屏障膜结构,还触发由细胞膜上的离子通道失活的相关级联反应,导致血管的通透性增加,加重脑水肿。减轻脑水肿的治疗策略有利于降低急性脑梗死的死亡率和致残率。因此,开发保护血脑屏障的药物有望成为急性脑梗死的有效策略。我们前期研究发现,抗氧化药物白藜芦醇、双环醇和丹皮酚等可以改善脑梗死后血脑屏障的通透性。注射用丹参多酚酸(salvianolic acids,SAs)是从传统中药丹参中提取的多种丹酚酸的水溶性混合物,具有对抗心肌缺血损伤的作用,广泛应用于治疗心肌缺血性疾病。其主要由丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸组成,各单体表现出以较强抗氧化作用为特点的多方面药理作用。其中SAB已在动物实验中证实有明确的脑保护作用。本实验复制小鼠永久性大脑中动脉栓塞模型(permanent middle cerebr alanery occlusion,p MCAO),应用SAs及阳性对照SAB进行干预,评价脑梗死后血脑屏障渗透性、神经功能、脑梗死体积、脑水肿,旨在证实其脑保护作用并探讨其可能机制。方法:采用成年健康雄性CD-1小鼠,应用改良的Longa线栓法制作小鼠p MCAO模型。实验一探究SAs的血脑屏障保护作用。72只小鼠随机分为四组(每组18只):Sham组,p MACO组,SAs组(p MACO+SAs 15mg/kg),SAB组(p MACO+SAB 10mg/kg)。药物干预组在大脑中动脉栓塞后即刻给予药物腹腔注射,相应的p MCAO组与Sham组给予等体积的生理盐水。其中每组6只于药物干预后即刻给予尾静脉注射2%伊文斯兰溶液(4ml/kg),24小时后心脏灌注生理盐水,留取脑组织进行伊文斯兰渗透量测定。每组其余12只于术后24小时进行脑保护作用检测:包括神经功能评分,脑水含量测定以及TTC染色法测定梗死体积。实验二进行SAs血脑屏障保护机制的探索。每组6只同时进行SOD活性和MDA含量检测,评定SAs抗氧化能力。每组3只蛋白免疫印迹法测定claudin-5,occludin,MMP-9和AQP-4蛋白表达量。结果:1注射用丹参多酚酸能改善神经功能缺损。术后24小时对Sham组、p MCAO组、SAs组、SAB组小鼠进行神经功能评分,用Mann Whitney U检验做统计分析。除Sham组外梗死各组小鼠均出现评分各异的左侧肢体偏瘫,神经功能评分明显升高。药物干预的SAs和SAB两组神经功能评分明显低于p MCAO组,且具有统计学意义(P0.05)。SAs和SAB两组比较神经功能缺损无明显差别。提示SAs能改善急性局灶性脑梗死小鼠的神经功能缺失,其效果与SAB相当。2注射用丹参多酚酸能减轻脑水肿。Sham组梗死侧脑组织水含量为79.67%±1.89%。p MCAO组小鼠梗死侧脑组织含水量明显升高至84.42%±2.87%(P0.05)。给予药物干预后,SAs组和SAB组梗死侧脑组织含水量降至82.49%±2.89%,81.81%±1.68%,与p MCAO组相比差异均有统计学意义(P0.05)。SAs和SAB两组比较梗死侧脑组织水含量差异无统计学意义(P0.05)。提示SAs能减少急性局灶性脑梗死小鼠脑水含量,其效果与SAB相当。3注射用丹参多酚酸能降低脑梗死体积。在p MCAO组出现苍白色梗死区域。与p MCAO组相比,SAs组和SAB组病变侧梗死体积明显减小,且差异有统计学意义(p MCAO vs.SAs,SAB:54.67%±3.14%vs.42.88%±2.75%,37.88%±1.29%,P0.05),而SAs组和SAB组患侧梗死体积差异无统计学意义(P0.05)。提示SAs能降低急性局灶性脑梗死小鼠脑梗死体积,其效果与SAB相当。4注射用丹参多酚酸能改善血脑屏障的通透性。在p MCAO术后24 h,通过测量脑中伊文斯兰的漏出量,来评价血脑屏障的通透性。蓝色区域表示伊文斯兰漏出,指示血脑屏障通透性增加。p MCAO组病变侧脑组织血脑屏障通透性明显增加(P0.05 vs.Sham组)。SAs组和SAB组病变侧脑组织伊文斯兰透过量均明显低于p MCAO(P0.05)。SAs组和SAB组比较,差异无统计学意义。提示SAs能降低急性局灶性脑梗死小鼠血脑屏障通透性,其效果与SAB相当。5注射用丹参多酚酸能增加机体抗氧化能力。本实验中与Sham组相比,p MCAO组24 h后小鼠梗死侧脑组织匀浆中总SOD和CU-Zn SOD的活性均明显下降,而SAs组与SAB组可明显提高两种SOD活性,减低MDA的含量,差异有统计学意义(P0.05)。而SAs组与SAB组之间并无明显差异,说明SAs可以清除急性局灶性脑梗死后自由基的脑损伤,提高机体抗氧化损伤的能力,从而发挥脑保护作用,其保护作用与SAB相当。6注射用丹参多酚酸对claudin-5,occludin,MMP-9,AQP-4蛋白表达量的影响。Western blot检测结果显示:脑梗死后24小时claudin-5和occludin蛋白表达降低,而MMP-9和AQP-4蛋白表达升高。药物干预后claudin-5和occludin蛋白表达升高,MMP-9和AQP-4蛋白表达降低,SAs组与p MCAO组相比差异有统计学意义(P0.05)。而SAs组与SAB组,差异无统计学意义。结论:我们研究发现,注射用丹参多酚酸具有脑保护作用,能降低脑梗死小鼠神经功能缺损,减轻脑水肿,减小脑梗死体积。进一步研究发现,注射用丹参多酚酸能够减轻梗死后血脑屏障的通透性,下调脑组织MMP-9和AQP-4的表达量,上调claudin-5和occludin表达量,同时提高SOD活性并降低MDA含量。保护作用与阳性对照物SAB相当。我们推断,注射用丹参多酚酸可以通过提高机体抗氧化能力,保护了血脑屏障,减轻脑水肿,进而保护梗死后脑组织。注射用丹参多酚酸有望成为治疗急性脑梗死的有效药物。
【关键词】：注射用丹参多酚酸 脑梗死 血脑屏障 SOD MDA MMP-9 AQP-4
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

中文摘要4-7
英文摘要7-11
英文缩写11-12
前言12-13
材料与方法13-25
结果25-27
附图27-30
讨论30-33
结论33
参考文献33-38
综述38-50
参考文献45-50
致谢50-51
个人简历51

【共引文献】

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1 王训翠;朱国旗;李庆林;;丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用[J];安徽中医学院学报;2011年04期

2 李艳;张端莲;王兰;蔡丽华;吴慧芬;王燕舞;桂志祥;梨莉;谈新提;;Sal B对肝癌细胞株HepG2的促凋亡作用[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2012年01期

3 ;Effects of Salvia miltiorrhiza on intestinal microflora in rats with ischemia/reperfusion liver injury[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2005年02期

4 XU Yan-hong;YANG Xin;WEI Jian-he;ZHANG Xing-li;ZHANG Zheng;GAO Zhi-hui;SUI Chun;;Cloning and Expression Analysis on 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A Reductase from Aquilaria sinensis[J];Chinese Herbal Medicines;2013年03期

5 湛月娥;徐江平;;丹酚酸B药理作用的研究进展[J];华南国防医学杂志;2007年02期

6 ;Effects of salvianolic acid B on proliferation, neurite outgrowth and differentiation of neural stem cells derived from the cerebral cortex of embryonic mice[J];Science China(Life Sciences);2010年06期

7 刘世静;蒋玉凤;王玺玫;刘智勤;蔡大勇;王文荣;黄启福;;丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠内皮细胞分泌的影响[J];北京中医药大学学报;2008年07期

8 张晓丽;叶志斌;;丹参在防治老年糖尿病肾病中的价值[J];老年医学与保健;2008年05期

9 石少明;李泽慧;田书林;唐民科;;丹酚酸B对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸类神经递质的影响[J];北京中医药大学学报;2012年08期

10 盛冲霄;黎红华;;丹参多酚对动脉粥样硬化大鼠血清CyPA、8-iso-PGF2α水平的影响[J];湖北中医杂志;2015年04期

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1 刘红云;丹参生长模拟模型及活性成分积累的调控研究[D];西北农林科技大学;2011年

2 郭永学;丹酚酸B的降解机理及纯化工艺研究[D];大连理工大学;2007年

3 韩蓓蓓;丹参多酚酸盐对缺血再灌注心肌血流及冠脉近端血流保护作用的实验研究[D];上海交通大学;2008年

4 姜恩平;蒺藜皂苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究[D];吉林大学;2010年

5 孙连庆;波动性高糖对氧化应激诱导的雪旺细胞凋亡通路的影响及干预研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年

6 姚刚;丹酚酸B对肾小管上皮细胞转分化防治作用的研究[D];南京医科大学;2012年

7 周丽娜;两类天然活性产物的转化与降解研究[D];沈阳药科大学;2012年