VAPB缺失诱导自噬的机制研究

发布时间：2022-07-13 15:12

　　目的:自噬在神经退行性疾病中扮演着重要的角色。本研究考察囊泡相关膜蛋白相关蛋白B（VAPB）是否参与自噬调控及其机制研究。方法:我们分别在HEK293T、HeLa和SH-SY5Y三种细胞系中,转染了两种VAPB干扰小RNA来沉默VAPB的表达,利用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中LC3和Beclin 1的蛋白水平。在HEK293T细胞中过表达FLAG-VAPB,检测细胞中的LC3和Beclin 1的蛋白水平。在HEK293中敲减VAPB,同时过表达GFP-LC3和FLAG-P62,通过免疫荧光的方法,检测GFP-LC3和FLAG-P62的共定位情况。在HEK293T细胞中沉默VAPB的表达,通过实时定量PCR（Real-time q PCR）检测Beclin1 m RNA水平的变化。在HEK293T细胞中同时沉默VAPB和Beclin 1的表达,检测细胞中的LC3蛋白水平。在m Cherry-LC3稳定转染的HEK293细胞中,同时沉默VAPB和Beclin 1的表达,检测细胞中m Cherry-LC3点状聚集的数量。在HeLa细胞中,敲减VAPB后过表达m Che... 

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

VAPB缺失激活自噬

VAPB缺失在转录水平激活Beclin1的表达

敲减VAPB以Beclin1依赖的方式诱导细胞自噬

【参考文献】：
期刊论文
[1]Tau-Induced Ca2+/Calmodulin-Dependent Protein Kinase-IV Activation Aggravates Nuclear Tau Hyperphosphorylation[J]. Yu-Ping Wei,Jin-Wang Ye,Xiong Wang,Li-Ping Zhu,Qing-Hua Hu,Qun Wang,Dan Ke,Qing Tian,Jian-Zhi Wang.  Neuroscience Bulletin. 2018(02)
[2]Development of Research on Huntington Disease in China[J]. Hong-Lei Li,Yan-Bin Zhang,Zhi-Ying Wu.  Neuroscience Bulletin. 2017(03)
[3]Inhibition of Autophagy by Estradiol Promotes Locomotor Recovery after Spinal Cord Injury in Rats[J]. Chao-Wei Lin,Bi Chen,Ke-Lun Huang,Yu-Sen Dai,Hong-Lin Teng.  Neuroscience Bulletin. 2016(02)
[4]Salidroside Protects Against 6-Hydroxydopamine-Induced Cytotoxicity by Attenuating ER Stress[J]. Kai Tao,Bao Wang,Dayun Feng,Wei Zhang,Fangfang Lu,Juan Lai,Lu Huang,Tiejian Nie,Qian Yang.  Neuroscience Bulletin. 2016(01)
[5]Regulation of autophagic flux by CHIP[J]. Dongkai Guo,Zheng Ying,Hongfeng Wang,Dong Chen,Feng Gao,Haigang Ren,Guanghui Wang.  Neuroscience Bulletin. 2015(04)



本文编号：3660268