毛蕊异黄酮通过调控TGF-β介导的间质化改变抑制胶质母细胞瘤迁徙和侵袭

发布时间：2017-05-15 08:09

  本文关键词：毛蕊异黄酮通过调控TGF-β介导的间质化改变抑制胶质母细胞瘤迁徙和侵袭，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:采用人胶质母细胞瘤细胞株U87和U251,研究毛蕊异黄酮(calycosin)抑制人胶质母细胞瘤迁徙和侵袭的作用及分子机制。方法:1、不同浓度calycosin处理U87和U251细胞24h,MTT检测calycosin对U87和U251生长增殖的影响。2、100、200μM calycosin分别处理U87和U251细胞24h,transwell迁徙侵袭实验检测calycosin对U87和U251迁徙和侵袭的影响;real-time PCR、western blot检测与迁徙侵袭相关分子及TGF-β表达。3、转染TGF-β质粒到U87细胞,calycosin处理24h,transwell迁徙侵袭实验及western blot检测TGF-β转染能否逆转calycosin对U87细胞迁徙侵袭的影响;4、肩胛下注射U87细胞制作裸鼠皮下胶质瘤模型,观察尾静脉注射calycosin对裸鼠的影响,每两天给裸鼠称重测量皮下肿瘤的大小,western blot检测瘤块中vimentin、N-cadherin、snail等分子表达。结果:1、100μM、200μM calycosin处理U87、U251细胞24h,MTT检测对U87和U251活力影响很小(P0.05)。2、100μM、200μM calycosin处理胶质母细胞瘤Transwell小室实验检测,发现100μM、200μM的calycosin作用24h可以抑制U87和U251迁移和侵袭的能力,且抑制作用具有浓度剂量依赖(P0.05)。3、100μM、200μM calycosin作用U87、U251 24h对vimentin、N-cadherin、snail、MMP2、MMP9及TGF-β的表达有抑制作用,并存在浓度剂量依赖关系。4、转染TGF-β质粒后,能逆转calycosin的抗迁徙侵袭作用,并逆转calycosin引起的vimentin、N-cadherin等间质相关分子及MMP2、MMP9的蛋白表达变化(P0.05)。5、在体内裸鼠实验中,皮下肿瘤的大小实验组小于对照组,皮下肿瘤中TGF-β的表达实验组低于对照组,皮下肿瘤中vimentin、N-cadherin等分子的表达实验组低于对照组(P0.05)。结论:1、calycosin在体内外实验均能抑制胶质母细胞瘤细胞的迁徙侵袭。2、calycosin通过调控TGF-β1的表达影响胶质母细胞瘤细胞上皮间质转化及MMP2、MMP9表达从而抑制胶质瘤细胞的迁徙和侵袭。
【关键词】：毛蕊异黄酮 上皮间质转化 迁徙 侵袭
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 实验材料12-15
• 2.1 U87和U251细胞12
• 2.2 免疫缺陷裸鼠12
• 2.3 主要设备仪器12
• 2.4 主要试剂耗材12-13
• 2.5 主要试剂配法13-15
• 2.5.1 完全培养基13
• 2.5.2 6.5×磷酸盐缓冲液（PBS）13-14
• 2.5.3 12.5×电泳缓冲液14
• 2.5.4 calycosin配制14
• 2.5.5 结晶紫染色溶液：14
• 2.5.6 6.5×转膜缓冲液14-15
• 第3章 实验方法15-23
• 3.1 U87和U251培养15
• 3.1.1 细胞培养和传代15
• 3.1.2 细胞复苏及冻存15
• 3.2 MTT实验检测细胞生长增殖能力15-16
• 3.3 Transwell实验检测细胞迁移16
• 3.4 Transwell实验检测细胞侵袭16-17
• 3.5 RNA提取及real-time pcr17-19
• 3.5.1 RNA的提取及浓度测定17
• 3.5.2 基因的反转录17-18
• 3.5.3 Q-PCR测定基因表达18-19
• 3.6 转染用质粒的准备19
• 3.7 细胞转染19-20
• 3.8 Western Blotting20-21
• 3.8.1 提取蛋白20
• 3.8.2 SDS－PAGE电泳20-21
• 3.9 裸鼠皮下肿瘤模型建立21
• 3.10 Western Blot检测裸鼠皮下瘤块中侵袭相关分子的蛋白表达21-22
• 3.11数据统计处理22-23
• 第4章 结果23-36
• 4.1 calycosin对人胶质母细胞瘤U87和U251细胞增殖生长的影响23-24
• 4.2 transwell迁徙实验检测calycosin对人胶质母细胞瘤迁徙的影响24-25
• 4.3 transwell小室实验检测calycosin对人胶质母细胞瘤侵袭的影响25-26
• 4.4 calycosin对U87和U251间质相关分子及基质金属蛋白酶的基因及蛋白表达有抑制作用26-29
• 4.5 calycosin对U87和U251细胞TGF-β表达有抑制作用29-30
• 4.6 转染TGF-β1 质粒后能逆转calycosin引起的间质相关分子及基质金属蛋白酶的表达变化并逆转calycosin引起的现象30-33
• 4.7 在裸鼠体内实验中calycosin能抑制U87细胞的迁徙和侵袭33-36
• 第5章 讨论36-39
• 第6章 结论39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述44-50
• 参考文献48-50

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