三邻甲苯基磷酸酯抑制人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的自噬机制研究

发布时间：2022-10-15 14:33

　　目的： 研究三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）对人成神经瘤细胞SH-SY5Y细胞分化的影响，毒性作用与自噬的关系以及自噬水平的改变，为拓宽对TOCP的神经毒性机制的认识，进一步理解和揭示神经退行性病变的机理提供依据。 方法： 1.选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型，MTT法检测TOCP对SH-SY5Y细胞增殖的影响，以全反式维甲酸（ATRA）为诱导分化工具药物，三甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬抑制剂，在分化诱导过程中以及诱导分化后以不同浓度TOCP（0-1.0mmol/L）作用，动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化，测量细胞突起长度，统计已分化细胞所占比例，台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。 2.在不同浓度TOCP（0-1.0mmol/L）处理后，采用自噬小体特异染色剂单丹尸磺酰胺（MDC）对细胞进行染色观察拍照后裂解，应用荧光分光光度计（激发光波长380nm、发射光波长525nm）测定荧光强度进行定量分析。 3.用脂质体转染GFP-LC3质粒至SH-SY5Y细胞，用ATRA进行诱导分化3天，1.0mmo... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1.材料
        1.1 细胞系及培养
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2. 实验方法
        2.1 TOCP 对 SH-SY5Y 细胞的增殖影响
        2.2 TOCP 对 SH-SY5Y 细胞形态分化的影响
        2.3 TOCP 对 SH-SY5Y 细胞自噬水平的影响
        2.4 细胞骨架蛋白降解方式分析
        2.5 TOCP 对自噬相关蛋白表达的影响
结果
    1.TOCP 对 SH-SY5Y 细胞分化的影响
        1.1 TOCP 对 SH-SY5Y 细胞增殖的影响
        1.2 ATRA 诱导 SH-SY5Y 细胞的形态学改变
        1.3 TOCP 对诱导中 SH-SY5Y 细胞分化的影响
        1.4 TOCP 对已分化细胞的影响
    2.TOCP 对 SH-SY5Y 细胞自噬水平的影响
        2.1 TOCP 导致 SH-SY5Y 细胞中自噬泡的增加
        2.2 SH-SY5Y 细胞 MDC 染色法后 OD 值比较
    3.骨架蛋白 NH-F 降解方式检测
    4.TOCP 处理对自噬相关蛋白表达的影响
讨论
结论
参考文献
附录 1
附录 2 综述
    参考文献
附录 3
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Beclin1在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义[J]. 康凯夫,王晓蔚,陈小伍,谭光明,康子婧.  南方医科大学学报. 2009(01)
[2]磷酸三邻甲苯酯诱导少突胶质细胞空泡样变及突起变性损伤[J]. 吴守芝,曹荣,宋俊峰.  中华劳动卫生职业病杂志. 2007(05)
[3]自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用[J]. 王赞宏,彭芝兰,段振玲,闫乃红.  四川大学学报(医学版). 2007(02)
[4]全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究[J]. 佟海侠,张继红,陆春伟,张锦华.  中国医学工程. 2007(01)
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[6]自噬在细胞生存和肿瘤发生中的作用[J]. 颜次慧,梁中琴,顾振纶,秦正红.  中国药理学通报. 2005(03)
[7]120例急性有机磷杀虫剂中毒患者的随访研究[J]. 李芳健,何凤生.  华南预防医学. 2004(01)
[8]切实搞好我国急性农药中毒的防治工作[J]. 黄金祥.  中华劳动卫生职业病杂志. 2002(06)
[9]食源性磷酸三邻甲苯酯中毒性周围神经病（附179例临床分析）[J]. 赵有奂.  实用内科杂志. 1993(05)
[10]三邻甲苯磷酸酯暴发中毒的临床观察[J]. 鲁锡荣,张寿林,张哲民,杨师,何凤生.  卫生研究. 1992(05)

博士论文
[1]Beclin 1沉默对维生素K3诱导的人肝癌细胞损伤的影响[D]. 杨闯.吉林大学 2009

硕士论文
[1]自噬性死亡在结肠癌化疗中的作用及其机制探讨[D]. 熊海燕.第二军医大学 2009



本文编号：3691481