小剂量EMAP-Ⅱ通过miR-330-3p/PKC-α途径增加血肿瘤屏障通透性的机制

发布时间：2022-10-18 17:23

　　目的:在脑胶质瘤中,血肿瘤屏障（blood-tumor barrier,BTB）的存在是限制大分子抗肿瘤药物进入肿瘤组织,从而影响化疗疗效的关键因素。与血脑屏障（blood brain barrier,BBB）的组成不同,胶质瘤细胞的生长破坏了正常的BBB结构,组成了BTB。BTB的通透性虽略高于BBB,但仍然能够阻止大分子抗肿瘤药物通过。因此,选择性增加BTB的通透性,有效地将药物转运到脑胶质瘤组织,切实提高脑胶质瘤的治疗效果,是脑胶质瘤综合治疗一个亟待解决的问题。内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ（endothelial monocyte-activating polypeptide-II,EMAP-Ⅱ）由其前体物质proEMAP-Ⅱ分解而成,能够调节内皮和单核细胞的功能。目前研究发现,EMAP-Ⅱ具有多种调控细胞功能的作用。有研究报道小剂量EMAP-Ⅱ（0.05nM）具有选择性开放BTB的作用。EMAP-Ⅱ通过cAMP/PKA通路以及PKC-ζ/PP2A通路选择性增加BTB的通透性。在体外BTB模型中,小剂量EMAP-Ⅱ能够与肿瘤微血管内皮细胞膜上的α-ATP合酶结合,通过下调紧密连接相... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 建立体外BTB模型
        2.2.3 细胞转染和分组
        2.2.4 跨内皮电阻(TransendothelialElectricResistance,TEER)值的测量
        2.2.5 辣根过氧化物酶通量(Horseradishperoxidaseflux,HRP)检测
        2.2.6 Real-timePCR
        2.2.7 Westernblot检测
        2.2.8 激光共聚焦显微镜观察细胞内蛋白表达和分布
        2.2.9 荧光素酶报告基因载体的构建及荧光素酶报告基因实验
        2.2.10 细胞增殖能力检测
        2.2.11 流式细胞仪分析细胞凋亡
        2.2.12 统计分析
3 实验结果
    3.1 MIR-330-3P在GECS中高表达,小剂量EMAP-II降低GECS中MIR-330-3P表达
    3.2 MIR-330-3P表达沉默能破坏BTB完整性,降低GECS内紧密连接蛋白表达,增加BTB通透性
    3.3 EMAP-II通过下调MIR-330-3P增加BTB通透性
    3.4 MIR-330-3P与PKC-Α靶向结合
    3.5 EMAP-II通过下调MIR-330-3P增加PKC-Α和P-PKC-Α的表达
    3.6 MIR-330-3P与PKC-Α激活剂以及抑制剂共同作用对BTB通透性和紧密连接蛋白表达的影响
    3.7 EMAP-II与ANTI-MIR-330-3P和PKC-Α激活剂共同作用,影响BTB通透性以及紧密连接相关蛋白表达
    3.8 EMAP-II与ANTI-MIR-330-3P和PKC-Α激活剂共同作用,能增加DOX对U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Novel drug-delivery approaches to the blood-brain barrier[J]. Xiaoqing Wang,Xiaowen Yu,William Vaughan,Mingyuan Liu,Yangtai Guan.  Neuroscience Bulletin. 2015(02)



本文编号：3692740