基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究

发布时间：2022-12-04 12:38

　　背景:蛛网膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage,SAH）是由于脑部的血管破裂出血,血液侵入蛛网膜下腔所致的一类高死亡率和高致残率的疾病,分原发性和继发性SAH。,近十几年来临床上对于SAH后血管痉挛的治疗已经有了很大的进步,但是对于SAH的预后改善尚无明显进展,常引起严重的神经功能损伤,包括脑炎性反应等引起的继发性脑损伤会直接影响到SAH患者的生活质量和生存率。SAH发生后72小时内出现的全脑直接损伤（即早期脑损伤）包括早期脑水肿、氧化应激性损害、神经细胞凋亡以及脑梗死。因此,本研究针对早期脑损伤相关的因子CIRP、及抑制剂C23蛋白、延迟继发性脑损伤相关的因子RBM3在神经细胞中的表达反应,以及如何调节此类反应因子和减轻神经元损伤的机制进行研究。方法:本课题首先从C57BL/6小鼠上获取神经元细胞,通过培养建立稳定的神经元细胞培养系,建立细胞SAH模型。通过视交叉池注血法,建立大鼠SAH模型。通过大鼠SAH模型,观察脑部颞叶皮层神经细胞的免疫荧光染色,确定CIRP和RBM3在脑内神经细胞的分布特点,使用real-time PCR和Western Blot法检测神... 

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 绪论
    第一节 蛛网膜下腔出血早期脑损伤的临床特征和治疗现状
        1.1.1 蛛网膜下腔出血发病特征,病因和发病率
        1.1.2 蛛网膜下腔出血早期脑损伤治疗现状
        1.1.3 蛛网膜下腔出血并发症及治疗
    第二节 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏机制和治疗靶点
        1.2.1 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏的特点
        1.2.2 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏的机制
        1.2.3 内皮细胞功能障碍或细胞凋亡作为潜在目标
        1.2.4 破坏紧密连接
    第三节 蛛网膜下腔出血早期脑损伤低温保护机制和出血后继发脑损伤炎性反应抑制在临床上的作用
        1.3.1 低温在蛛网膜下腔出血中的脑损伤治疗进展
        1.3.2 CIRP在中枢神经系统疾病的研究进展
        1.3.3 RBM3在中枢神经系统疾病的研究进展
        1.3.4 C23在疾病治疗中的研究进展
    参考文献
第二章 低温影响CIRP表达在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中的保护作用研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 主要实验仪器
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 主要试剂的配制方法
        2.2.4 主要实验方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 大鼠分组建模后死亡率及脑组织形态
        2.3.2 大鼠颞叶皮层CIRP mRNA和蛋白的表达
        2.3.3 大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径)
        2.3.4 CIRP主要表达在神经元细胞,在星形胶质细胞中只有少部分表达
        2.3.5 凋亡染色(四组大鼠建模后1d,冰冻切片TUNEL染色)
        2.3.6 免疫组化DAB染色(四组大鼠建模后1d,石蜡切片)
        2.3.7 尼氏染色(四组大鼠建模后3d,石蜡切片Nissl染色)
        2.3.8 电镜结果(四组大鼠建模后1d,电镜超薄切片)
        2.3.9 转棒实验
        2.3.10 神经元的体外实验中Western blot检测CIRP和Caspase3的表达
        2.3.11 原代培养神经元细胞的凋亡染色
    2.4 讨论
        2.4.1 治疗性低温对正常大鼠产生强烈的应激损伤,运动功能下降
        2.4.2 治疗性低温减轻了SAH大鼠线粒体途径的细胞凋亡,改善了运动功能
        2.4.3 CIRP是新发现的重要促炎因子,治疗性低温降低了SAH大鼠脑部皮层CIRP的表达,减轻了早期脑损伤
    2.5 结论
    2.6 参考文献
第三章 低温影响RBM3表达在蛛网膜下腔出血继发性脑损伤中的保护作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 主要实验仪器
        3.2.2 主要实验试剂
        3.2.3 主要试剂的配制方法
        3.2.4 主要实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 四组大鼠颞叶皮层RBM3蛋白和mRNA的表达
        3.3.2 大鼠(建模三天后)脑组织中RBM3蛋白在神经元细胞和星形胶质细胞的表达
        3.3.3 大鼠(建模三天后)脑组织切片RBM3免疫组化染色
        3.3.4 四组大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径)
        3.3.5 大鼠(建模三天后)脑组织的细胞凋亡染色
        3.3.6 大鼠(建模七天后)脑组织石蜡切片尼氏染色
        3.3.7 四组大鼠的转棒实验
        3.3.8 神经元细胞的体外培养及实验结果
    3.4 讨论
    3.5 结论
    3.6 参考文献
第四章 C23在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中保护作用研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 主要实验仪器
        4.2.2 主要实验试剂
        4.2.3 主要试剂的配制方法
        4.2.4 主要实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 大鼠颞叶皮层CIRP的表达(WB检测,建模后1d)
        4.3.2 大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径,建模后1d)
        4.3.3 大鼠脑组织中IL-6、IL-1β、TNF-a的表达水平(建模后1d)
        4.3.4 凋亡染色结果(建模后1d)
        4.3.5 免疫组化染色结果(建模后1d)
        4.3.6 尼氏染色结果(建模后1d)
        4.3.7 转棒实验结果(建模后1d)
    4.4 讨论
    4.5 结论
    4.6 参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Lessons from tenascin-C knockout mice and potential clinical application to subarachnoid hemorrhage[J]. Masato Shiba,Hidenori Suzuki.  Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]Matricellular proteins as possible biomarkers for early brain injury after aneurysmal subarachnoid hemorrhage[J]. Hidenori Suzuki,Hirofumi Nishikawa,Fumihiro Kawakita.  Neural Regeneration Research. 2018(07)
[3]Implications of periostin in the development of subarachnoid hemorrhage-induced brain injuries[J]. Hirofumi Nishikawa,Hidenori Suzuki.  Neural Regeneration Research. 2017(12)
[4]Toll-like receptor 4 as a possible therapeutic target for delayed brain injuries after aneurysmal subarachnoid hemorrhage[J]. Takeshi Okada,Hidenori Suzuki.  Neural Regeneration Research. 2017(02)



本文编号：3708286