不同级别脑胶质瘤中差异microRNA的表达谱研究

发布时间：2017-05-17 09:00

  本文关键词：不同级别脑胶质瘤中差异microRNA的表达谱研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：脑胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,约占颅内肿瘤的50%-60%。肿瘤具有浸润性生长、易复发、侵袭性强、血管丰富等恶性生物学特征,患者预后较差,平均生存期较短。随着表观遗传学和分子遗传学的不断发展,大量研究从分子水平和细胞水平揭示胶质瘤进展的机制。Micro RNAs(mi RNAs)是一类内源性非编码小RNA(约22nt),通过与靶基因非完全互补结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达。包括脑胶质瘤在内的许多肿瘤中,都观察到mi RNA的表达异常,并影响细胞的增殖、凋亡、侵袭、血管生成等重要的生物学过程。目前大量的研究集中在胶质瘤进展过程中miRNA的异常及其发挥的作用,对级别特异的miRNA表达谱研究较少。本研究采用mi RNA芯片技术,通过对比肿瘤及配对的瘤周组织,筛选出不同级别脑胶质瘤中差异mi RNA分子的表达谱,为寻找脑胶质瘤发生发展中发挥重要作用及不同级别间特异的mi RNA分子提供参考。异柠檬酸脱氢酶1(Isocitrate dehydrogenases1,IDH1)突变和MGMT基因启动子甲基化在胶质瘤中普遍存在,和患者预后关系密切。有研究报道:IDH1基因突变的胶质瘤细胞的组蛋白甲基化程度更高;IDH1和MGMT联合能更好的预测胶质瘤患者预后。IDH1和MGMT在脑胶质瘤的进展过程中是否受mi RNA调控从而形成内在关联。进一步探讨二者之间的关联性及其可能的机制,将为胶质瘤患者的诊治提供更多理论依据。实验方法:第一部分收集临床脑胶质瘤标本,提取组织总RNA,利用mi RNA芯片筛选出脑胶质瘤和配对瘤周组织中差异表达的mi RNA分子。q RT-PCR验证mi RNA芯片结果的可靠性。生物信息学软件预测这些mi RNA潜在的靶基因。第二部分直接测序法检测脑胶质瘤样本中IDH1突变情况。第三部分n MSP法和MSP-DHPLC法检测胶质瘤组织中MGMT基因突变的情况。第四部分卡方检验分析IDH1基因突变和MGMT基因启动子甲基化的关联性。结果:1.脑胶质瘤中差异miRNA的表达谱分析(1)Mi RNA芯片技术是一种高效可靠的高通量分析脑胶质瘤差异mi RNA表达谱的方法(2)通过9例胶质瘤组织和与之配对的瘤周组织对比,利用mirna芯片分析了1926个mirna分子。共筛选出13个具有明显差异表达的mirna分子,其中表达水平上调的mirna分子12个,表达水平下调的1个。(3)在whoii、whoiii、whoiv级脑胶质瘤中分别有8、9、15个mirna分子表达异常。(4)首次发现mir-4489在脑胶质瘤中低表达,mir-4489可能在肿瘤进展中发挥重要作用。(5)脑胶质瘤发展过程中,mir-106b-25cluster可能作为mir-17-92cluster的辅助,提高肿瘤的恶性程度。(6)利用生物信息学软件对13个差异表达的mirna分子的靶基因进行预测,共找到926个潜在的靶基因。这些基因主要富集在与神经系统和肿瘤相关的生物学过程和信号通路上。2.脑胶质瘤中idh1基因突变检测与分析(1)46.62%(62/133)的胶质瘤患者检测出idh1基因突变。突变主要发生于whoii级、whoiii级胶质瘤和继发性胶质母细胞瘤。(2)胶质瘤患者idh1突变和患者年龄显著相关(p=0.001),两者的相关度为r=0.296。3.脑胶质瘤中mgmt基因启动子甲基化表达研究(1)经nmsp法检测,66.33%(65/98)的脑胶质瘤组织中发生mgmt基因启动子甲基化。经msp-dhplc法检测,65.71%(23/35)的脑胶质瘤组织中发生mgmt基因启动子甲基化。(2)四格表x2检验比较nmsp和msp-dhplc法检出率的一致性,两种方法检出率差异无统计学意义(x2=0.004,p=0.948)。(3)spearman等级相关分析提示:mgmt启动子甲基化和脑胶质瘤病理级别的相关性不显著(p0.05),与患者年龄也无明显相关性(p=0.654)4.idh1突变与mgmt基因启动子甲基化关联性分析:(1)x2检验进行关联度分析提示:idh1突变与mgmt基因启动子甲基化关联显著(x2=6.57,p=0.01),列联系数c=0.217,二者低度相关。(2)926个潜在的靶基因中,不包括mgmt和idh1。提示筛选出的13个差异表达的mirna不直接调控mgmt和idh1的表达。结论:综上所述,本文研究表明:1.MiRNA芯片技术是脑胶质瘤中寻找分子标记的可靠方法。2.利用mi RNA芯片筛选出不同级别脑胶质瘤中差异mi RNA的表达谱,为进一步寻找级别特异和肿瘤恶性进展中重要的mi RNA提供了重要参考。3.本研究首次发现mi R-4489在脑胶质瘤中低表达,其在肿瘤中的作用有待进一步研究。4.IDH1突变和MGMT启动子甲基化存在着关联性,二者在肿瘤发生发展过程中可能存在调控关系。5.筛选出的mi RNA并不直接调控MGMT和IDH1基因,这些mi RNA是否参与IDH1及MGMT调控及其机制有待进一步研究。
【关键词】：microRNA芯片 IDH1突变 MGMT基因启动子甲基化 脑胶质瘤
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略语表5-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 脑胶质瘤中差异micro RNA的表达谱分析14-29
• 2.1 材料方法14-19
• 2.2 结果19-26
• 2.3 讨论26-28
• 2.4 小结28-29
• 第三章 脑胶质瘤中IDH1基因突变检测与分析29-38
• 3.1 材料方法29-32
• 3.2 结果32-36
• 3.3 讨论36-37
• 3.4 小结37-38
• 第四章 脑胶质瘤中MGMT基因启动子甲基化的表达研究38-46
• 4.1 材料方法38-42
• 4.2 结果42-43
• 4.3 讨论43-45
• 4.4 小结45-46
• 第五章 IDH1突变与MGMT基因启动子甲基化关联性分析46-48
• 5.1 方法46
• 5.2 结果46-47
• 5.3 讨论47
• 5.4 小结47-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-57
• 文献综述Micro RNA在脑胶质瘤诊断和化疗中的作用57-64
• 参考文献61-64
• 硕士期间主要发表论文及获得的奖励64-65
• 致谢65-66
• 附件66

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本文编号：372932