羟基酪醇的分离纯化及其对脑胶质细胞HEB和脑胶质瘤细胞U251的凋亡作用机理研究

发布时间：2023-01-26 05:43

　　羟基酪醇（HT）,化学名为3,4-二羟基苯乙醇,是一种环烯醚萜类羟基芳族化合物,具有脂溶性和水溶性物理学特性的醇临二酚。在生物学方面已研究表明其具有抗氧化性、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗癌和抗菌等活性。它作为橄榄油中的主要成分而在地中海一带饮食健康中起到重要作用。脑胶质瘤是中枢神经系统临床常见疾病之一,它的治疗在世界医学属于疑难病症已被公认。因其病理学上行为展现为浸润性生长,虽然显微技术已广泛运用,但是用手术将其彻底切除仍达不到预期效果。替莫唑胺是目前治疗脑胶质瘤较为可信的药物,但效果仍然不堪理想。新型、高效、低毒的抗胶质瘤药物的研发仍值得期待。 本研究旨从橄榄苦苷粗提物或橄榄叶的盐酸水解液中分离纯化得到高纯度的HT,再进一步研究其是否有诱导脑胶质细胞HEB和脑胶质瘤细胞U251凋亡的效果,从而探讨其抗脑胶质瘤的生物学活性。这将为橄榄叶及富含橄榄皂苷相关资源的合理充分利用提供有力的实验依据和理论基础,为HT在肿瘤预防与治疗等运用方面开拓新视野。以下为实验方法及结论概述： （1）用0.5M的HCl水解橄榄苦苷粗提物,水解条件为时间15min、温度105℃、料液比1/30,... 

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摘要
ABSTRACT
绪言
第1章 引言
    1.1 羟基酪醇分离纯化方法研究进展
        1.1.1 前言
        1.1.2 羟基酪醇的粗提
            1.1.2.1 从液-固橄榄油废料中提取
            1.1.2.2 从橄榄压榨厂废水中提取
            1.1.2.3 从橄榄叶中提取
            1.1.2.4 从橄榄果汁中提取
        1.1.3 羟基酪醇的纯化
            1.1.3.1 有机溶剂萃取法及离子型树脂吸附
            1.1.3.2 非离子型树脂吸附和分子筛法
            1.1.3.3 酶及固定化酶法
            1.1.3.4 超临界CO_2萃取
    1.2 羟基酪醇的生物学活性概述
        1.2.1 抗菌活性
        1.2.2 促进新陈代谢和延缓衰老
        1.2.3 抗炎症活性
        1.2.4 抗癌活性
        1.2.5 展望
    1.3 本课题研究的目的、意义及主要内容
        1.3.1 课题来源
        1.3.2 研究目的及意义
        1.3.3 主要研究内容
第2章 羟基酪醇的分离纯化
    2.1 橄榄苦苷粗提物的盐酸水解液中分离纯化羟基酪醇
        2.1.1 实验材料
            2.1.1.1 主要化学试剂
            2.1.1.2 主要仪器设备
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.0 色谱条件
            2.1.2.1 HT标准曲线的制作
            2.1.2.2 橄榄苦苷的水解
            2.1.2.3 水解液的澄清
            2.1.2.4 澄清液的萃取
            2.1.2.5 萃取液的浓缩与HT含量检测
        2.1.3 结果与分析
            2.1.3.1 HT的标准曲线
            2.1.3.2 水解与澄清
            2.1.3.3 萃取与浓缩
        2.1.4 小结
    2.2 从橄榄叶的盐酸水解液中分离纯化纯化羟基酪醇
        2.2.1 实验材料
            2.2.1.1 主要化学试剂
            2.2.1.2 主要仪器设备
        2.2.2 实验方法
            2.2.2.1 色谱条件
            2.2.2.2 橄榄叶的处理及水解
            2.2.2.3 水解液的澄清
            2.2.2.4 树脂的处理及筛选
            2.2.2.5 LX-18C吸附量的筛选、洗脱及纯度检测
            2.2.2.6 用ODS柱在AKTA~(TM)purifier系统中纯化澄清液
        2.2.3 结果与分析
            2.2.3.1 水解和澄清
            2.2.3.2 树脂的筛选
            2.2.3.3 LX-18C吸附量的筛选、洗脱及纯度检测
            2.2.3.4 AKTA~(TM)purifier系统中ODS分离的效果
        2.2.4 小结
第3章 羟基酪醇对脑胶质HEB和脑胶质瘤U251细胞凋亡作用研究
    3.1 羟基酪醇对正常脑胶质细胞HEB凋亡作用研究
        3.1.1 实验材料
            3.1.1.1 细胞株
            3.1.1.2 主要化学试剂
            3.1.1.3 主要仪器设备
        3.1.2 实验方法
            3.1.2.1 细胞的培养
            3.1.2.2 细胞的复苏
            3.1.2.3 细胞的换液和传代
            3.1.2.4 细胞的冻存
            3.1.2.5 显微镜下观察HT对HEB细胞的形态学影响
            3.1.2.6 MTT法检测HT对HEB细胞增殖抑制作用
            3.1.2.7 DNA ladder法检测HT对HEB细胞凋亡作用
            3.1.2.8 电镜下观察HT对HEB细胞结构的影响
            3.1.2.9 流式细胞仪检测HT对HEB细胞的影响
            3.1.2.10 Western Blotting检测凋亡蛋白
            3.1.2.11 统计学分析
        3.1.3 结果与分析
            3.1.3.1 HT对HEB细胞的抑制作用
            3.1.3.2 HT作用HEB细胞形态变化
            3.1.3.3 HT对HEB细胞脱氧核糖核酸(DNA)的影响
            3.1.3.4 HT诱导HEB细胞凋亡
            3.1.3.5 HT对HEB细胞周期的影响
            3.1.3.6 HT对HEB细胞凋亡蛋白表达影响
        3.1.4 小结
    3.2 羟基酪醇对脑胶质瘤细胞U251凋亡作用研究
        3.2.1 实验材料
            3.2.1.1 细胞株
            3.2.1.2 主要化学试剂
            3.2.1.3 主要仪器设备
        3.2.2 实验方法
            3.2.2.1 显微镜下观察HT对脑胶质瘤细胞U251的形态学影响
            3.2.2.2 MTT法检测HT对脑胶质瘤细胞U251增殖抑制作用
            3.2.2.3 DNA ladder法检测HT对脑胶质瘤细胞U251凋亡作用
            3.2.2.4 电镜下观察HT对脑胶质瘤细胞U251结构的影响
            3.2.2.5 流式细胞仪检测HT对脑胶质瘤细胞U251的影响
            3.2.2.6 Western Blotting检测凋亡蛋白
            3.2.2.7 统计学分析
        3.2.3 结果与分析
            3.2.3.1 HT对U251细胞的抑制作用
            3.2.3.2 HT作用U251细胞形态变化
            3.2.3.3 HT对U251细胞脱氧核糖核酸(DNA)的影响
            3.2.3.4 HT诱导U251细胞凋亡
            3.2.3.5 HT对U251细胞周期的影响
            3.2.3.6 HT对U251细胞凋亡蛋白表达影响
        3.2.4 小结
第4章 总结与展望
    4.1 总结
        4.1.1 HT分离纯化的效果
        4.1.2 HT诱导脑胶质HEB和脑胶质瘤U251细胞的凋亡性
    4.2 展望
致谢
参考文献
附录 缩略词
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3732236