miR-103/195/15b与LINC00665介导SALL4影响细胞增殖与迁移研究

发布时间：2023-02-18 21:50

　　近年来的研究表明,miRNAs与lncRNAs在基因的调控方面发挥着重要作用,其表达异常与肿瘤的发生和发展密切相关。SALL4在脑胶质瘤中异常过表达,与胶质瘤的发生有关。miRNAs与SALL4的调控关系目前只有我们实验室的一例报道,lncRNA对SALL4的调控作用还未见报道。实验室前期发现,具有相同种子区的miR-103、miR-195、mi R-15b过表达后,竞争性的抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。为进一步研究miR-103、miR-195、miR-15b的作用,本论文将从miR-103、miR-195、miR-15b表达下调的角度研究其功能。应用MTT增殖实验发现,miR-103、miR-195、miR-15b表达下调后,能够显著的促进细胞的增殖能力;应用Transwell迁移、侵袭实验发现,miR-103、miR-195、mi R-15b表达下调后,能够不同程度的促进细胞的迁移和侵袭能力,并且同时转染miR-103、miR-195、miR-15b抑制剂后,对细胞的迁移和侵袭能力并没有产生协同增加的作用。说明miR-103、miR-195、miR-15b对脑胶质瘤细胞的作...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 课题研究背景及目的和意义
    1.2 SALL4的国内外研究进展及分析
        1.2.1 SALL4简介
        1.2.2 SALL4基因与肿瘤发生的关系
    1.3 miRNAs研究现状
        1.3.1 miRNAs简介
        1.3.2 miRNAs与肿瘤
        1.3.3 miR-103/195/15b在肿瘤中的研究进展
    1.4 lncRNAs的研究现状
        1.4.1 lncRNAs简介
        1.4.2 lncRNAs的转录和加工过程
        1.4.3 lncRNAs的作用机制
        1.4.4 lncRNAs与肿瘤发生发展的关系
    1.5 主要研究内容
    1.6 实验技术路线
第2章 实验材料方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 抗体
        2.1.3 实验主要试剂及配方
        2.1.4 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养及转染
        2.2.2 细胞增殖实验
        2.2.3 PCR反应
        2.2.4 荧光素酶双报告实验
        2.2.5 慢病毒包装构建稳转细胞系
        2.2.6 Transwell检测细胞的迁移和侵袭实验
        2.2.7 细胞周期实验
        2.2.8 Western blot
        2.2.9 免疫荧光
        2.2.10 原位杂交
        2.2.11 caspase3/7 检测细胞凋亡
    2.3 生物信息学预测网站及分析软件
第3章 miR-103/195/15b以SALL4为靶基因影响细胞的增殖与迁移
    3.1 miR-103/195/15b表达下调后对细胞增殖与迁移的影响
        3.1.1 miR-103/195/15b表达下调效果检测
        3.1.2 miR-103/195/15b表达下调后对细胞增殖的影响
        3.1.3 miR-103/195/15b表达下调后对细胞迁移的影响
        3.1.4 miR-103/195/15b表达下调后对细胞侵袭的影响
    3.2 SALL4为miR-103/195/15b直接靶基因的确认
        3.2.1 荧光素酶双报告系统检测
        3.2.2 miR-103/195/15b表达下调后对SALL4的影响
        3.2.3 确认miR-103/195/15b以SALL4为靶基因的回复实验
    3.3 讨论
    3.4 本章小结
第4章 LINC00665与SALL4共表达促进胶质瘤细胞的增殖与迁移
    4.1 LINC00665与SALL4相关性分析
        4.1.1 生物信息学分析
        4.1.2 LINC00665在胶质瘤组织和细胞系中的表达分析
        4.1.3 LINC00665与SALL4在胶质瘤组织中表达相关性分析
    4.2 LINC00665在细胞中的定位
    4.3 LINC00665对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响
        4.3.1 慢病毒包装并筛选LINC00665过表达的细胞系
        4.3.2 LINC00665过表达后促进胶质瘤细胞的增殖能力
        4.3.3 LINC00665过表达后促进胶质瘤细胞的迁移与侵袭
        4.3.4 LINC00665过表达后对胶质瘤细胞周期的影响
        4.3.5 LINC00665过表达后对miR-103/195/15b、SALL4、c-Myc和Tenascin-C的表达影响
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
结论
参考文献
致谢



本文编号：3745603