通过调节细胞骨架稳定性防止迟发性神经元死亡的实验研究

发布时间：2023-03-03 22:04

　　纤维性肌动蛋白(F-actin)与微管是神经元的主要细胞骨架,神经元死亡以二者进行性降解为主要特征,因此采用F-actin和微管稳定性药物来加固神经元细胞骨架,对于防治神经元迟发性死亡可能具有一定作用。我们前期实验结果显示,癫痫持续状态后,树突棘F-actin进行性减少,但是树突干及胞体内F-actin却出现聚集现象。由于树突棘基底部F-actin附着在树突干内的微管上,我们推测癫痫脑内F-actin聚集可能是由于树突干微管解聚后F-actin失去锚定和支撑作用所致,树突棘F-actin损伤直接引起神经元兴奋性异常,而树突干微管解聚则会加重树突棘F-actin的损伤。脑缺血与癫痫持续状态的病理过程相似,但是采用脑缺血模型研究海马神经元迟发性死亡的成功率较高,重复性较好。因此,本项目拟采用匹鲁卡品和四血管阻断法(4-VO)诱导的迟发性神经元死亡模型,进一步探讨神经元迟发性死亡后F-actin和微管的动力学变化及神经元迟发性死亡的进程,进而采用细胞骨架稳定性药物探讨细胞骨架药物对迟发性神经元死亡的影响,旨在阐明F-actin和微管在癫痫和脑缺血发展过程中与神经元死亡的关系,进而探讨同时增强...

【文章页数】：146 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词
第1章 文献综述
    1.1 迟发性神经元死亡概述
    1.2 迟发性神经元死亡与肌动蛋白细胞骨架关系
        1.2.1 肌动蛋白细胞骨架概述
        1.2.2 肌动蛋白细胞骨架的分布
        1.2.3 肌动蛋白细胞骨架动态调节
        1.2.4 四血管阻断法(4-VO)诱导的迟发性神经元后肌动蛋白细胞骨架的变化
    1.3 迟发性神经元死亡与微管细胞骨架关系
        1.3.1 微管细胞骨架的概述
        1.3.2 微管细胞骨架的分布
        1.3.3 微管细胞骨架的动态调节
        1.3.4 4-VO诱导的迟发性神经元后微管细胞的骨架变化
    1.4 展望
第2章 通过稳固F-actin细胞骨架减缓迟发性神经元死亡的实验研究
    2.1 前言
    2.2 材料与仪器
        2.2.1 实验仪器
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 试剂配制
        2.2.4 实验动物
    2.3 实验方法
        2.3.1 动物模型的建立
        2.3.2 药物治疗与实验分组
        2.3.3 行为学观察实验
        2.3.4 组织样品的制备
        2.3.5 Western blot
        2.3.6 F-actin染色
        2.3.7 Nissl和 Neun染色
        2.3.8 GFAP和 Iba1 染色
        2.3.9 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 匹鲁卡品诱导的迟发性神经元死亡模型行为学观察
        2.4.2 FK506 部分抑制了cofilin去磷酸化和F/G比值的变化
        2.4.3 FK506 部分抑制SE后 F-actin解聚
        2.4.4 FK506 部分抑制了神经元迟发性死亡
        2.4.5 FK506 部分抑制了癫痫PSE胶质细胞增生
    2.5 讨论
    2.6 小结
第3章 体内和体外迟发性神经元死亡模型中F-actin和微管的改变
    3.1 前言
    3.2 体内实验部分
        3.2.1 实验仪器
        3.2.2 实验试剂及抗体
        3.2.3 实验动物
        3.2.4 实验方法
        3.2.5 实验结果
    3.3 体外实验部分
        3.3.1 实验仪器
        3.3.2 实验试剂
        3.3.3 试剂配制
        3.3.4 实验方法
        3.3.5 实验结果
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 通过稳固微管细胞骨架减缓迟发性神经元死亡的实验研究
    4.1 前言
    4.2 材料与仪器
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 试剂配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 EpoD治疗4-VO诱导迟发性神经元死亡模型
        4.3.2 组织样本的制备
        4.3.3 Nissl染色
        4.3.4 Fluoro-Jade B染色
        4.3.5 微管相关蛋白海马CA1 区免疫荧光染色
        4.3.6 图像分析
        4.3.7 统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 Epo D治疗4-VO诱导的迟发性神经元死亡模型实验分组
        4.4.2 Epo D治疗前后轻微抑制海马CA1 区神经元的损伤程度
        4.4.3 EpoD治疗前后对微管相关蛋白的影响
    4.5 讨论
    4.6 小结
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3753192