褪黑素对H 2 O 2 诱导的大鼠脑微血管周细胞损伤的影响

发布时间：2023-03-11 05:07

　　目的 第一部分：探讨获取高纯度大鼠原代脑微血管周细胞的分离和培养方法,并对其鉴定。 第二部分：探讨褪黑素在过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠脑微血管周细胞损伤中的保护作用。 第三部分：探讨褪黑素抑制H2O2诱导的大鼠脑微血管周细胞凋亡的保护机制。 方法 第一部分：选取10只3周龄Wistar大鼠,取大脑,去除白质,剪碎成大约1mm3大小,通过两次酶消化、20%BSA离心和33%连续密度Percoll梯度离心获得纯度较高的大脑微血管片段,接种于35mm培养皿中,加入含10%FBS的DMEM培养基,37℃、5%CO2细胞孵箱中培养,2天后更换新鲜培养基；采用倒置显微镜观察周细胞生长状况及其形态；免疫细胞化学法检测NG2、α-SMA、vWF及GFAP表达,鉴定分离的细胞及其纯度；MTT法检测绘制其增殖曲线。 第二部分：应用MTT试验和台盼蓝拒染试验检测不同浓度H2O2处理后脑微血管周细胞的细胞活力；应用胞内反应性氧簇检测试剂盒检测褪黑素及抗化剂GSH对胞内活性氧聚集的影响；采用TUNEL法确定细胞死亡类型；检测褪黑素及GSH对H202诱导大鼠脑微血管周细胞损伤的保护作用。 第三部分：检测褪黑素及...

【文章页数】：143 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 大鼠原代脑微血管周细胞的分离、培养及鉴定
    材料与方法
    结果
    讨论
    小结
第二部分 褪黑素抑制H₂O₂诱导的大鼠脑微血管周细胞凋亡
    材料与方法
    结果
    讨论
    小结
第三部分 褪黑素抑制H₂O₂诱导的大鼠脑微血管周细胞凋亡机制的研究
    材料与方法
    结果
    讨论
    小结
参考文献
全文总结
英文缩写词表
文献综述 1
    参考文献
文献综述 2
    参考文献
实验文章 1
实验文章 2
实验文章 3
实验文章 4
个人简历及攻读期成果
致谢
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