ATF3-SiRNA抑制人脑胶质母细胞瘤的实验研究

发布时间：2023-03-26 22:27

　　胶质母细胞瘤是神经系统最常见的高致命性恶性肿瘤,尽管目前治疗手段已经有了很多进展,其预后仍然很差。它占所有神经胶质肿瘤的60%,患者的总体生存率在过去20年中却没有发生显著变化。即使进行了积极的治疗,基本上所有的胶质母细胞瘤都会复发,最终导致死亡。肿瘤的侵袭是一种不同组织学类型的细胞恶性转化时的复杂行为,涉及一系列分子间、细胞间、细胞与胞外基质间相互作用的多机制过程,这些过程使得肿瘤细胞迁移并侵袭到周围健康脑组织中。以往的研究显示,蛋白酶、胞外基质成分、粘连细胞分子的相互作用及激活相关的多种信号通路在神经胶质瘤细胞侵袭和转移中起重要作用,每一成分都可以被视为潜在神经胶质瘤治疗靶点。近来的研究提示某些在应激状态下被激活的信号分子,在特定情况下发挥促进肿瘤细胞迁移的作用,很可能促进了胶质母细胞的侵袭。ATF3(activating transcription factor 3,转录激活因子3)是细胞应激反应中最早表达的转录因子之一,是介导细胞外信号如细胞应激、生长因子和激素等产生生物效应作用的关键调节者,是一种早期反应基因。许多研究都证实ATF3还是一种适应性反应基因,是细胞对那些扰乱机体...

【文章页数】：145 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
英文缩略词表
前言
第一部分 人脑胶质瘤中ATF3、Maspin和MMP2 蛋白和mRNA表达
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
    结果
        1 正常脑组织和各级胶质细胞瘤中ATF3、Maspin和MMP2 蛋白的表达和分布
        2 正常脑组织和各级胶质细胞瘤中ATF3、Maspin和MMP2 的mRNA相对定量
        3 各级胶质细胞瘤和正常脑组织中 ATF3、Maspin 和 MMP2 的免疫印迹检测
    讨论
    小结
第二部分 ATF3-siRNA体外抑制胶质母细胞瘤的实验研究
    第一章 U373MG细胞中ATF3 siRNA的筛选与鉴定
        材料与方法
            1 实验材料
            2 实验方法
        结果
            1 pSilencer/siRNA-ATF3 前体表达载体的构建
            2 pSilencer/siRNA-ATF3 前体表达载体在U373MG细胞中干扰效果的检测
    第二章 ATF3-siRNA抑制U373MG后细胞生长表型及其他功能学研究
        材料与方法
            1 实验材料
            2 实验方法
        结果
            1 治疗后U373MG细胞形态学改变
            2 治疗后细胞活性及对顺铂的敏感性的变化（MTT法检测结果）
            3 治疗后对细胞周期的影响（细胞周期流式细胞术检测结果）
            4 ATF3 基因表达抑制后对细胞凋亡的影响（细胞凋亡TUNEL检测结果）
            5 Transwell实验检测细胞体外侵袭能力的变化
            6 治疗后免疫细胞化学检测ATF3、Maspin和MMP-2 表达水平的变化
            7 治疗后实时荧光定量PCR检测ATF3、Maspin和MMP-2 mRNA表达水平的变化
            8 治疗后免疫印迹检测ATF3、MMP-2 和Maspin表达水平的变化
        讨论
        小结
第三部分 ATF3-siRNA裸鼠体内治疗胶质母细胞瘤的研究
    材料和方法
        1 实验材料
        2 实验方法
    结果
        1 成功建立裸鼠体内 U37MG 细胞异种移植瘤动物模型
        2 治疗后各组肿瘤的组织学形态
        3 ATF3-si RNA 抑制移植瘤生长
        4 治疗后裸鼠体内肿瘤组织的TUNEL检测结果
        5 免疫组织化学检测治疗后各组肿瘤组织中ATF3、Maspin和MMP2表达水平
        6 荧光定量PCR检测治疗后各组肿瘤组织中ATF3、Maspin和MMP2 mRNA水平的表达
        7 免疫印迹检测治疗后各组肿瘤组织中ATF3、Maspin和MMP2 表达水平
    讨论
    小结
结论
参考文献
综述 ATF3研究新进展
    参考文献
个人简历及在学期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3771864