小鼠体细胞向多能性神经前体细胞和成熟多巴胺能神经元的直接转分化
发布时间：2023-03-27 04:48
目前在全世界范围内,神经退行性疾病已经成为影响人类健康的最主要的疾病之一。以帕金森氏症为例,全世界65岁以上人口中有约1%的人长期受其困扰。帕金森氏症最主要的病理特征之一是病人中脑黑质区多巴胺能神经元的退行性死亡。由于其损伤部位相对集中,而且神经系统的再生能力又十分有限,因而使得细胞移植治疗成为当前治疗帕金森氏症的最有效手段之一。理想的治疗帕金森氏症的细胞资源需要同时具备几个主要特征：培养方便,可以在体外大量增殖,并且能够分化得到中脑多巴胺能神经元,同时又具备较低的致瘤风险。然而到目前为止,无论是胚胎干细胞或体细胞来源的诱导型多能性干细胞,还是由体细胞直接转化而来的成熟神经元,都无法同时满足这些要求。 本研究旨在通过两条途径将不同类型的小鼠体细胞转变为成熟的多巴胺能神经元：一条途径是利用外源因子先将体细胞重编程成为具有多能性和自我更新能力的神经前体细胞,再将其分化为成熟的多巴胺能神经元；而另一种方法是通过外源因子的导入,将体细胞直接诱导为成熟的多巴胺能神经元。主要研究结果如下： (1)小鼠睾丸支持细胞是来源于中胚层的终末分化细胞,具有分离纯度高,培养方法简单等优势,因此是研究不同谱系的...
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 细胞重编程技术的研究进展
1.1.1 体细胞核移植技术
1.1.2 细胞融合技术
1.1.3 外源因子诱导的体细胞向多能性干细胞的重编程
1.2 细胞谱系重编程(转分化)
1.2.1 传统转分化研究中存在的缺陷
1.2.2 外源因子诱导的细胞谱系重编程
1.3 体细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.1 小鼠成纤维细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.2 小鼠肝细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.3 人类成纤维细胞向成熟神经元的直接转分化
1.4 本研究旨在通过两条途径将不同类型的小鼠体细胞转变为成熟的多巴胺能神经元
1.4.1 体细胞向具有多巴胺能神经元分化能力的多能性神经前体细胞的直接转分化
1.4.2 体细胞向成熟的多巴胺能神经元的直接转分化
1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器与设备
2.1.3 主要试剂及试剂盒
2.1.4 常用试剂及配制
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠体细胞的分离和培养
2.2.2 目的基因的克隆
2.2.3 小鼠体细胞向神经前体细胞的直接诱导
2.2.4 体细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
2.2.5 免疫荧光染色以及体外分化效率的统计
2.2.6 体细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植实验
2.2.7 电生理功能检测
2.2.8 细胞全基因组表达谱分析
2.2.9 PCR检测外源因子在基因组中的整合情况
2.2.10 Southern Blot
2.2.11 Realtime RT-PCR
3 结果与分析
3.1 小鼠睾丸支持细胞向多能性神经前体细胞的直接转分化
3.1.1 新生小鼠睾丸支持细胞的分离、培养和鉴定
3.1.2 诱导小鼠睾丸支持细胞向多能性神经前体细胞的转化
3.1.3 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的鉴定
3.1.4 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的全基因组表达谱分析
3.1.5 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
3.1.6 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植
3.1.7 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外电生理功能检测
3.2 小鼠尾尖成纤维细胞向多能性神经前体细胞的直接转分化
3.2.1 新生小鼠尾尖成纤维细胞的分离、培养和鉴定
3.2.2 诱导小鼠尾尖成纤维细胞向多能性神经前体细胞的转化
3.2.3 小鼠尾尖成纤维细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
3.2.4 小鼠尾尖成纤维细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植
3.3 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟多巴胺能神经元的直接转分化
3.3.1 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟神经元的直接诱导
3.3.2 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟多巴胺能神经元的直接诱导
4 讨论
4.1 特异性转录因子在细胞命运决定中的作用
4.1.1 调控胚胎干细胞多能性和自我更新能力的分子网络
4.1.2 调控神经干细胞多能性和自我更新能力的分子网络
4.1.3 特异性转录因子诱导的体细胞向神经前体细胞的重编程
4.2 体细胞来源的诱导型神经细胞在帕金森氏症临床治疗中的应用前景
4.2.1 诱导型多巴胺能神经元在帕金森氏症细胞移植治疗中的应用
4.2.2 诱导型神经前体细胞在帕金森氏症细胞移植治疗中的应用
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间已发表的学术论文
本文编号：3772423
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 细胞重编程技术的研究进展
1.1.1 体细胞核移植技术
1.1.2 细胞融合技术
1.1.3 外源因子诱导的体细胞向多能性干细胞的重编程
1.2 细胞谱系重编程(转分化)
1.2.1 传统转分化研究中存在的缺陷
1.2.2 外源因子诱导的细胞谱系重编程
1.3 体细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.1 小鼠成纤维细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.2 小鼠肝细胞向成熟神经元的直接转分化
1.3.3 人类成纤维细胞向成熟神经元的直接转分化
1.4 本研究旨在通过两条途径将不同类型的小鼠体细胞转变为成熟的多巴胺能神经元
1.4.1 体细胞向具有多巴胺能神经元分化能力的多能性神经前体细胞的直接转分化
1.4.2 体细胞向成熟的多巴胺能神经元的直接转分化
1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器与设备
2.1.3 主要试剂及试剂盒
2.1.4 常用试剂及配制
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠体细胞的分离和培养
2.2.2 目的基因的克隆
2.2.3 小鼠体细胞向神经前体细胞的直接诱导
2.2.4 体细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
2.2.5 免疫荧光染色以及体外分化效率的统计
2.2.6 体细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植实验
2.2.7 电生理功能检测
2.2.8 细胞全基因组表达谱分析
2.2.9 PCR检测外源因子在基因组中的整合情况
2.2.10 Southern Blot
2.2.11 Realtime RT-PCR
3 结果与分析
3.1 小鼠睾丸支持细胞向多能性神经前体细胞的直接转分化
3.1.1 新生小鼠睾丸支持细胞的分离、培养和鉴定
3.1.2 诱导小鼠睾丸支持细胞向多能性神经前体细胞的转化
3.1.3 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的鉴定
3.1.4 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的全基因组表达谱分析
3.1.5 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
3.1.6 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植
3.1.7 小鼠睾丸支持细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外电生理功能检测
3.2 小鼠尾尖成纤维细胞向多能性神经前体细胞的直接转分化
3.2.1 新生小鼠尾尖成纤维细胞的分离、培养和鉴定
3.2.2 诱导小鼠尾尖成纤维细胞向多能性神经前体细胞的转化
3.2.3 小鼠尾尖成纤维细胞来源的诱导型神经前体细胞的体外分化
3.2.4 小鼠尾尖成纤维细胞来源的诱导型神经前体细胞的体内移植
3.3 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟多巴胺能神经元的直接转分化
3.3.1 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟神经元的直接诱导
3.3.2 小鼠胎儿成纤维细胞向成熟多巴胺能神经元的直接诱导
4 讨论
4.1 特异性转录因子在细胞命运决定中的作用
4.1.1 调控胚胎干细胞多能性和自我更新能力的分子网络
4.1.2 调控神经干细胞多能性和自我更新能力的分子网络
4.1.3 特异性转录因子诱导的体细胞向神经前体细胞的重编程
4.2 体细胞来源的诱导型神经细胞在帕金森氏症临床治疗中的应用前景
4.2.1 诱导型多巴胺能神经元在帕金森氏症细胞移植治疗中的应用
4.2.2 诱导型神经前体细胞在帕金森氏症细胞移植治疗中的应用
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间已发表的学术论文
本文编号：3772423
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3772423.html
最近更新
教材专著
