乙醇诱导C2C12成肌细胞E3连接酶Atrogin-1表达的机制研究

发布时间：2017-05-20 12:01

  本文关键词：乙醇诱导C2C12成肌细胞E3连接酶Atrogin-1表达的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：酒精相关的肌病的特点是严重的骨骼肌生化和结构的变化,肌萎缩是其临床表现之一。乙醇在机体代谢过程中产生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起细胞的氧化应激和脂质过氧化。泛素连接酶是骨骼肌萎缩中的关键酶,目前已将泛素连接酶E3s中的Atrogin-1作为检测肌萎缩发生的早期生物标记物。在一些肌萎缩模型研究中发现,ROS可激活MAPK里的P-38通路,上调Atrogin-1的表达,继而引起肌萎缩。但乙醇与肌萎缩之间的研究甚少,且大都集中在动物模型,本实验以乙醇(100mM)染毒C2C12成肌细胞为模型,来探究乙醇引起肌萎缩的机制及具体信号通路。目的:本研究通过体外培养小鼠C2C12骨骼肌成肌细胞,观察乙醇对骨骼肌细胞的氧化损伤情况,及Atrogin-1的蛋白表达水平,研究在C2C12成肌细胞模型中,乙醇对Atrogin-1蛋白水平的影响,并探讨其中涉及的细胞信号转导通路,为抑制肌肉萎缩提供新的治疗方法。方法:1.乙醇(100mM)、NAC(2uM)处理C2C12细胞24小时后,采用荧光酶标仪检测不同组之间ROS水平;2.乙醇(100mM)分别作用于C2C12细胞不同时间,分别为0h、8h、16h、24h,然后检测各个不同组之间Atrogin-1蛋白水平的表达,观察不同的处理时间对Atrogin-1蛋白水平的表达有无变化;3.乙醇(100mM)、NAC(2uM)处理C2C12细胞8小时后,用Western Blot实验技术检测不同组之间Atrogin-1蛋白水平的表达;4.乙醇(100mM)、NAC(2u M)处理C2C12细胞8小时后,用Western Blot实验技术检测磷酸化P-38蛋白水平的表达;加入MAPK细胞信号转导通路中的P38通路抑制剂SB203580,用Western Blot实验技术检测不同组Atrogin-1蛋白水平的表达,观察SB203580对Atrogin-1蛋白的表达是否有影响。结果:1.乙醇(100mM)作用于C2C12细胞24小时后,ROS水平升高,与正常组有显著性差异(P0.05);但NAC(2uM)预处理后,ROS水平降低;2.在乙醇(100m M)作用于细胞8-24小时中,Atrogin-1蛋白水平与对照组相比,均有显著性差异(P0.05),且在8小时表达最多;3.乙醇(100mM)作用C2C12细胞8小时后,Atrogin-1蛋白水平明显升高,与对照组有显著性差异(P0.05),但NAC(2u M)预处理后,由乙醇引起的升高的Atrogin-1蛋白水平下降;4.乙醇(100mM)作用C2C12细胞8小时后,磷酸化蛋白P-38水平明显升高,与对照组有显著性差异(P0.05),但经NAC(2u M)预处理后,由乙醇引起的升高的P-38磷酸化水平下降;加入抑制剂SB203580后,与乙醇组相比,Atrogin-1蛋白水平明显降低。结论:1.乙醇(100mM)可引起C2C12细胞中活性氧产生的增加,诱发氧化应激反应。NAC(2uM)可降低由乙醇引起的ROS升高。2.ROS可通过MAPK信号通路里的P-38途径引起Atrogin-1蛋白水平升高。
【关键词】：乙醇 C2C12 ROS P-38通路 Atrogin-1
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R746
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-18
• 一、实验材料12-15
• （一）、实验对象12
• （二）、主要实验仪器12-13
• （三）、主要实验试剂13
• （四）、主要试剂的配制13-15
• 二、实验方法15-18
• （一）、细胞培养15
• （二） 乙醇及NAC对C2C12细胞内活性氧的影响15-16
• （三）、乙醇作用不同时间对Atrogin-1 表达的影响16-17
• （四）、乙醇及NAC对C2C12细胞Atrogin-1 表达的影响17
• （五）、乙醇诱导Atrogin-1 高表达与MAPK通路的关系17-18
• 三、统计学分析18
• 结果18-21
• 1.乙醇及NAC对C2C12细胞活性氧的影响18-19
• 2.乙醇作用不同时间对Atrogin-1 表达的影响19-20
• 3.乙醇及NAC对C2C12细胞Atrogin-1 表达的影响20
• 4.P38MAPK信号通路对乙醇诱导Atrogin-1 表达的影响20-21
• 讨论21-24
• 结论24
• 参考文献24-29
• 综述29-39
• 参考文献33-39
• 致谢39-40

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