前脑缺血星形胶质细胞神经酰胺特异性积累机制及其对神经元损伤的影响

发布时间：2023-05-25 00:40

　　目的：探讨前脑缺血再灌后星形胶质细胞神经酰胺(ceramide)特异性积累的分子机制以及对神经元损伤的影响。 方法：采用成年清洁级雄性SD大鼠,建立四动脉阻断前脑缺血再灌注模型,侧脑室分别给予中性鞘磷脂酶2(N-SMase2) siRNA、control siRNA、N-SMase2活性抑制剂GW4869、TNFa受体抑制剂R-7050、p38MAPK抑制剂SB-203580、PP2B抑制剂、PKCδ抑制剂Rottlerin、A2bAR拮抗剂MRS-1754、N-SMase2激动剂柔红霉素(DNR)。观察中性鞘磷脂酶(N-SMase)、酸性鞘磷脂酶(A-SMase)及N-SMase2活性变化；免疫荧光或免疫组化检测ceramide及相关蛋白神经细胞定位；尼氏染色实验观察神经元损伤情况；TUNEL实验观察神经元凋亡变化；Western blot实验评价N-SMase2、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白水平变化；免疫共沉淀实验检测N-SMase2与RACK1、EED之间的结合作用：Realtime PCR测定IL-1β、IL-6、TNFα等前炎症因子mRNA水平变化。同时采用体外分离...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 实验材料与试剂
        1.1 仪器设备
        1.2 试剂来源
    2. 研究方法
        2.1 实验动物及大鼠脑缺血模型制作
        2.2 侧脑室織药物和siRNA
        2.3 大鼠原代星形胶质细胞的培养
        2.4 大鼠原代神经元的培养
        2.5 氧戲糖剥脱模型(OGD)
        2.6 细胞共培养
        2.7 海马组织蛋白提取
        2.8 蛋白浓度测定
        2.9 免疫印迹（Western blot)
        2.10 免疫共沉淀
        2.11 鞘磷脂海活性测定和特异性中性鞘磷脂酶2活性測定
        2.12 免疫突光及免疫组织化学
        2.13 尼氏染色
        2.14 TUNEL细胞调亡检测法
        2.15 Real-time RT-PCR
        2.16 数据处理
结果
    1.前脑缺血诱导ceramide在海马星形胶质细胞而不是神经元的特异性积累且与N-SMase激活密切相关
    2.前脑缺血诱导星形胶质细胞中N-SMase2而不是A-SMase的快速激活
    3.脑缺血/再灌中N-SMase2激活参与了诱导神经元损伤
    4.TNFaR/RACKl/EED通路部分介导了脑缺血N-SMase2的早期激活
    5.P38MAPK；诱导的N-SMase2磷酸化是脑缺血N-SMase2/ceramide途径激活的重要机制
    6.AibAR调控了脑缺血P38MAPK剌激N-SMase2/ceramide途径的撖活
    7.脑缺血/再灌中N-SMase2的潋活剌撖了星形胶质细胞炎症因子的生成
    8.前脑缺血星形胶质细胞ceramide积累诱导了周围神经元炎性次级损伤
实验数据及英文注释
讨论
小结
参考文献
附录(一) 综述
    参考文献
附录(二) 缩略词表
附录(三) 发表文章
致谢



本文编号：3822593