MGMT基因启动子甲基化在脑胶质瘤发生中的作用

发布时间：2017-05-22 09:00

  本文关键词：MGMT基因启动子甲基化在脑胶质瘤发生中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:对临床收集并放置于零下80摄氏度低温冰箱的不同级别的胶质瘤标本,取部分组织石蜡包埋并切片后进行免疫组化检测肿瘤标本MGMT甲基化情况,另取部分标本组织用组织DNA提取试剂盒提取全基因组DNA,采用巢式PCR对MGMT启动子基因甲基化进行扩增,以及变性高效液相色谱(DHPLC)检测并验证MGMT启动子甲基化存在情况。方法:第一部分:将人脑胶质瘤各个标本以及瘤周正常脑组织分别取部分组织进行免疫组化实验,观察肿瘤组织及瘤周正常组织的甲基化情况。第二部分:将人脑胶质瘤切取部分用于全基因组DNA提取,并采用巢式PCR对MGMT启动子基因甲基化进行扩增,后进行变性高效液相色谱(DHPLC)验证MGMT启动子甲基化情况以及采用甲基化特异性PCR进行胶质瘤标本甲基化检测。结果:1、分别对不同WHO分级的胶质瘤进行MGMT启动子基因甲基化检测,发现2例WHO I级胶质瘤有0例出现甲基化,WHO II级胶质瘤30例,检测出14例出现甲基化,甲基化比例为14/30即甲基化率为46.7%,WHO II-III级胶质瘤11例,检测出4例有存在甲基化,甲基化比例为4/11即甲基化率36.4%,WHO III级胶质瘤22例,检测出13例存在有甲基化,甲基化比例为13/22即甲基化率为59.1%,WHO IV级胶质瘤26例,检测出8例存在甲基化,甲基化比例为8/26,及甲基化率为30.8%。2、同时对该91例胶质瘤标本采用高效液相色谱(DHPLC)、甲基化特异性PCR检查甲基化情况以及进行免疫组化观察甲基化情况,三种方法检测的结果上存在一致性。结论:通过对不同级别的胶质瘤进行甲基化特异性PCR、免疫组化以及高效液相色谱(DHPLC)检查启动子MGMT甲基化情况,发现在较低级别的胶质瘤中存在MGMT甲基化发生频率较大,而在高级别的胶质瘤中MGMT甲基化的频率则相对要低一些,但无论是在低级别人脑胶质瘤还是在较高级别的人脑胶质瘤中都存在一定频率的MGMT启动子基因甲基化,这表明MGMT启动子基因甲基化是导致人脑胶质瘤发生的因素之一。
【关键词】：胶质瘤 MGMT启动子基因 甲基化
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-25
• 2.1 试剂和材料12-14
• 2.1.1 主要试剂12-13
• 2.1.2 主要仪器13
• 2.1.3 主要试剂配制13-14
• 2.2 实验方法和步骤14-24
• 2.2.1 胶质瘤标本及瘤周正常组织标本14-16
• 2.2.2 HRP免疫组织化学染色16-18
• 2.2.3 胶质瘤标本组织DNA提取18-19
• 2.2.4 DNA亚硫酸氢盐修饰19-21
• 2.2.5 甲基化特异性PCR21-22
• 2.2.6 以肿瘤组织提取的DNA为模板进行甲基化扩增，产物进行琼脂糖凝胶电泳22-24
• 2.2.7 变性高效液相色谱（DHPLC）检测甲基化24
• 2.3 统计学数据分析24-25
• 第3章 结果25-31
• 3.1 胶质瘤MGMT蛋白表达的免疫组化检测25-26
• 3.2 胶质瘤标本组织DNA提取后浓度选择26-27
• 3.3 胶质瘤标本MGMT基因启动子区MSP结果27-28
• 3.4 变性高效液相色谱（DHPLC）检测甲基化情况28-29
• 3.5 MGMT基因启动子区甲基化与胶质瘤患者年龄、性别及病理诊断之间的关系29-31
• 第4章 讨论31-35
• 4.1 DNA甲基化与肿瘤之间的关系31-32
• 4.2 MGMT表达阳性及基因启动子区甲基化与胶质瘤32-34
• 4.3 MGMT基因启动子区甲基化检测方法34-35
• 第5章 结论与展望35-36
• 5.1 结论35
• 5.2 展望35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-39
• 综述39-44
• 参考文献43-44

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本文编号：385195