人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经损伤修复研究

发布时间：2017-05-22 15:15

  本文关键词：人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经损伤修复研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分泌的膜性囊泡(microvesicle,MVs)对SD(sprague-dawley,SD)大鼠坐骨神经损伤的修复作用,初步探讨其发挥作用的机制。方法1、超速离心法分离及纯化hESC-MSC-MVs,电子显微镜对其进行鉴定。2、建立SD大鼠坐骨神经压榨性损伤模型,应用坐骨神经功能指数(Sciatic nerve function index,SFI)和HE染色等方法评价hESC-MSC-MVs对大鼠坐骨神经损伤的治疗效果。实时定量PCR(Real-time PCR)检测hESC-MSCs和hESC-MSC-MVs与坐骨神经损伤修复相关的mi RNA。3、体外分离SD胎鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs),与hESC-MSC-MVs共培养,免疫荧光染色检测神经特异性标志GAP-43的表达并评价hESC-MSC-MVs对NSCs分化的作用。结果1、成功分离和纯化了hESC-MSC-MVs,通过电子显微镜观察了hESC-MSC-MVs的分泌过程。2、构建了SD大鼠坐骨神经压榨性损伤模型。神经损伤后第2周,与对照组相比,hESC-MSCs组和hESC-MSC-MVs组足印形态优于PBS组,hESC-MSCs组受损侧较正常侧仍有差异,hESC-MSC-MVs组损伤侧与正常侧足印相似。hESC-MSCs及hESC-MSC-MVs能够促使模型大鼠受损侧后肢形态恢复及再生神经纤维数量的增加,显著降低腓肠肌肌肉萎缩程度。Real-time PCR检测发现,hESC-MSC-MVs以及hESC-MSCs中含有miRNA-222、miRNA-125、miRNA-29b、mi RNA-29c,其中miRNA-222相对表达量最高。3、成功分离SD胎鼠的NSCs。hESC-MSCs及hESC-MSC-MVs都能够促使NSCs分化为神经元,神经突起较密而且长,而hESC-MSC-MVs作用效果更加明显。结论hESC-MSC-MVs对坐骨神经压榨性损伤有显著修复作用,修复机制可能与其能够显著促使NSCs分化为神经元,进而促使神经纤维的衔接有关。
【关键词】：人胚胎干细胞 间充质干细胞 微囊泡 坐骨神经损伤 神经干细胞
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R745.4
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 主要英文缩略词索引12-13
• 第一章 绪论13-24
• 1.1 周围神经损伤13
• 1.2 周围神经损伤再生机制13-14
• 1.3 间充质干细胞14-19
• 1.3.1 间充质干细胞概述15
• 1.3.2 间充质干细胞的来源及生物学特性15-16
• 1.3.3 间充质干细胞与周围神经损伤16-19
• 1.4 间充质干细胞分泌的微囊泡19-22
• 1.4.1 微囊泡概述19-20
• 1.4.2 微囊泡来源及生物学特性20-21
• 1.4.3 间充质干细胞分泌的微囊泡与神经组织损伤修复21-22
• 1.5 小结22-24
• 第二章 研究目的、内容、方法、实验设计方案和意义24-26
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究内容24
• 2.3 研究方法24-25
• 2.4 实验设计方案25
• 2.5 研究意义25-26
• 第三章 人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡的分离26-40
• 3.1 材料26-29
• 3.1.1 人胚胎干细胞26
• 3.1.2 主要器材及耗材26-27
• 3.1.3 试剂及配制27-29
• 3.2 方法29-33
• 3.2.1 饲养层制备29-30
• 3.2.2 h ESCs培养30-31
• 3.2.3 人胚胎干细胞自发分化为间充质干细胞31
• 3.2.5 h ESC-MSC-MVs的分离和纯化31-32
• 3.2.6 透射电镜样本制备32
• 3.2.7 细胞爬片及扫描电镜样品制备32
• 3.2.8 细胞超薄切片样品制备32-33
• 3.3 结果33-36
• 3.3.1 人胚胎干细胞形态33-34
• 3.3.2 人胚胎干细胞自发分化为间充质干细胞34-35
• 3.3.3 h ESC-MSC-MVs形态特征及分泌过程35-36
• 3.4 讨论36-40
• 第四章 人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经压榨性损伤修复研究及机制40-54
• 4.1 材料40-42
• 4.1.1 人胚胎干细胞40
• 4.1.2 实验用动物40
• 4.1.3 主要仪器及耗材40-41
• 4.1.4 主要试剂及配制41-42
• 4.2 方法42-47
• 4.2.1 h ESC-MSCs培养42-43
• 4.2.3 大鼠坐骨神经损伤修复实验43-44
• 4.2.4 外部体征观察44
• 4.2.5 坐骨神经功能指数44-45
• 4.2.6 标本组织的收集和制备45
• 4.2.7 坐骨神经损伤修复相关的mi RNA检测45-47
• 4.3 结果47-51
• 4.3.1 术后外部体征观察47-48
• 4.3.2 坐骨神经功能指数检测48-49
• 4.3.3 神经纤维HE染色49
• 4.3.4 腓肠肌肌肉HE染色49-50
• 4.3.5 mi RNA定量检测50-51
• 4.4 讨论51-54
• 第五章 人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡促使神经干细胞分化研究54-62
• 5.1 材料54-56
• 5.1.1 人胚胎干细胞54
• 5.1.2 实验用动物54-55
• 5.1.3 主要器材及耗材55
• 5.1.4 主要试剂及配制55-56
• 5.2 方法56-57
• 5.2.1 人胚胎干细胞自发分化为间充质干细胞培养及鉴定56
• 5.2.2 h ESC-MSC-MVs分离提纯及浓度测试56
• 5.2.3 神经干细胞分离及培养56-57
• 5.2.4 实验分组57
• 5.2.5 神经干细胞分化57
• 5.3 结果57-60
• 5.3.1 神经干细胞形态特征58
• 5.3.2 神经干细胞的分化58-59
• 5.3.3 神经元荧光染色59-60
• 5.4 讨论60-62
• 结论与展望62-63
• 结论62
• 展望62-63
• 参考文献63-82
• 致谢82-83
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文及获奖情况83
• 一、发表论文83
• 二、参加课题研究83
• 三、获奖情况83

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 耿嘉tD;;人胚胎干细胞核心转录调控途径[J];国外医学(计划生育/生殖健康分册);2006年04期

2 ;人胚胎干细胞转化为肝细胞[J];现代医院;2008年08期

3 ;最大人胚胎干细胞遗传变异研究结果发布[J];生物医学工程与临床;2012年01期

4 石程;王承艳;沈浣;;人胚胎干细胞建系研究中的伦理管理[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2012年01期

5 谢蜀生;应当重视人胚胎干细胞的研究[J];科技导报;2000年05期

6 胡显文,陈昭烈,黄培堂;人胚胎干细胞的研究[J];生物技术通讯;2000年02期

7 徐令,黄绍良,李树浓,吴旋;人胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用[J];中国病理生理杂志;2001年01期

8 李涛,麦庆云,周灿权,庄广伦;人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究[J];解剖学报;2003年06期

9 孙博文;人胚胎干细胞建系和鉴定[J];生命科学;2003年04期

10 王东红;人胚胎干细胞及其潜在应用[J];中国热带医学;2004年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 韦东;;人胚胎干细胞相关发明可专利性研究[A];发展知识产权服务业，支撑创新型国家建设-2012年中华全国专利代理人协会年会第三届知识产权论坛论文选编(第一部分)[C];2011年

2 吴应积;FenhuaLuo;Aileen Lu;John W.McDanold;;间隙连接蛋白在人胚胎干细胞中的表达[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

3 张丽瑞;李旭;陈葳;;人胚胎干细胞建系的方法学研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年

4 罗向东;;人胚胎干细胞的分离培养及应用前景[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年

5 赵海军;赵惠萍;林戈;周药;刘天成;卢光t;;不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血干细胞分化的影响[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

6 龚玉萍;Tamihiro Kamata;Andrew D.Leavitt;;体外人胚胎干细胞造血/血管内皮系统发育的研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

7 鲁振宇;张云山;王毅娜;罗海宁;杜ng瑞;;应用人胚胎肺组织成纤维细胞饲养层培养人胚胎干细胞的研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

8 刘超;Su Guo;;人胚胎干细胞神经外胚层分化研究[A];中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编[C];2013年

9 陈彤;王征宇;DavidTScadden;陈彤;谢毅;;人胚胎干细胞向造血祖细胞诱导分化的研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

10 裴海云;王韫芳;杨印祥;习佳飞;裴雪涛;;诱导人胚胎干细胞分化为肝细胞样细胞[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前4条

1 记者 白毅;全球最大规模人胚胎干细胞遗传变异研究成果发布[N];中国医药报;2011年

2 记者 胡德荣;125株人胚胎干细胞株系将全球共享[N];健康报;2012年

3 记者 徐瑞哲;为“细胞治疗”进入临床铺路[N];解放日报;2012年

4 本版编辑邋海飞鱼 Emily;人胚胎干细胞生成红细胞输血不用愁[N];医药经济报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 许慧芳;人胚胎干细胞的优化培养以及向神经干细胞的分化研究[D];华中科技大学;2009年

2 俞妍慧;组织因子在人胚胎干细胞诱导分化过程中表达及调控的研究[D];中南大学;2013年

3 周兟;维持人胚胎干细胞不分化的鼠饲养层细胞标准化操作的建立与残留的丝裂霉素C对人胚胎干细胞基因组稳定性影响的研究[D];中南大学;2009年

4 焦淑洁;血管内皮生长因子在人胚胎干细胞神经分化过程中的作用及相关机制研究[D];华中科技大学;2009年

5 尹明;基于基因打靶技术的人胚胎干细胞向功能性肝细胞分化的研究[D];吉林大学;2014年

6 刘雨潇;人胚胎干细胞向造血细胞诱导分化的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

7 徐晨明;人胚胎干细胞建系及线粒体和细胞骨架的分布模式与胚胎干细胞分化关系的研究[D];浙江大学;2008年

8 苏位君;人胚胎干细胞来源内皮细胞作为细胞载体对转移性乳腺癌进行靶向治疗的研究[D];南开大学;2012年

9 方贞付;人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2005年

10 曾桥;人胚胎干细胞体内分化途径获取神经干细胞及DNA甲基化酶Dnmt3a和Dnmt3b表达下调对人胚胎干细胞的影响[D];中南大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 韦东;人胚胎干细胞相关发明可专利性研究[D];华东政法大学;2011年

2 王丹;三氯乙烯抑制人胚胎干细胞向心肌分化的机制研究[D];苏州大学;2015年

3 吴一湘;酪氨酸促进人胚胎干细胞向视网膜色素上皮高效分化的研究[D];天津医科大学;2015年

4 马永宾;人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经损伤修复研究[D];江苏大学;2016年

5 韩兵;原始生殖细胞来源的人胚胎干细胞分离、培养与鉴定[D];重庆医科大学;2004年

6 耿嘉tD;人胚胎干细胞建系相关影响因素研究[D];郑州大学;2007年

7 姜祖韵;小鼠胚胎干细胞建系及人胚胎干细胞培养体系的建立初探[D];浙江大学;2005年

8 张颖;人胚胎干细胞传代培养方法与其遗传稳定性的相关研究[D];郑州大学;2014年

9 鲍柳君;人胚胎干细胞结合丝素材料向神经细胞分化的实验研究[D];苏州大学;2009年

10 王毅娜;人胚胎干细胞建系、初步鉴定及应用不同方法冷冻人胚胎干细胞的研究[D];天津医科大学;2007年

  本文关键词：人胚胎干细胞源间充质干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经损伤修复研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：386069