孕酮对OGD/R损伤的星形胶质细胞AQP4的影响及机制
发布时间：2023-11-20 17:49
脑水肿是缺血再灌注后出现的主要临床症状,大量研究显示孕酮对脑有显著保护作用,能减轻脑创伤及中风动物模型脑损伤后的脑水肿,促进脑组织和功能的修复。最近有研究发现AQP4参与了孕酮对动物模型的创伤性脑水肿的保护作用。孕酮对定位于星形胶质细胞上的AQP4表达及功能的调控及机制国内外未见报道。 目的： 通过研究孕酮对缺血再灌注损伤的星形胶质细胞水肿形成的影响,探讨AQP4在孕酮调控星形胶质细胞水肿过程中的作用。 内容： 1.星形胶质细胞的原代培养,胶质酸性纤维蛋白(GFAP)免疫组化染色鉴定。 2.建立氧糖剥夺(OGD)细胞模型,并研究OGD对星形胶质细胞的影响作用,选择适宜OGD时间(4h)进行再灌注(R)。 3.观察不同再灌注时间对星形胶质细胞肿胀及AQP4的影响,选择最佳再灌注时间点(24h)进行研究。 4.孕酮对OGD/R损伤星形胶质细胞的水肿及AQP4的影响,孕酮受体(PR)及蛋白激酶C (PKC)在此过程中的作用研究。 方法： 1.从新生大鼠皮质取材,通过细胞培养、差速粘附和震荡分离并纯化星形胶质细胞进行原代培养。 2.免疫组化、HE染色对原代培养的星形胶质细胞进行纯度鉴定及形态学...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
研究现状、成果
研究目的、方法
一、大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及鉴定
1.1 对象和方法
1.1.1 大鼠星型胶质细胞原代培养
1.1.2 星形胶质细胞GFAP免疫细胞化学染色
1.1.3 星形胶质细胞HE染色
1.1.4 形胶质细胞生长曲线测定
1.2 结果
1.2.1 原代培养星形胶质细胞镜下形态观察
1.2.2 星形胶质细胞GFAP免疫细胞化学染色
1.2.3 星形胶质细胞HE染色
1.2.4 星形胶质细胞生长曲线测定
1.3 讨论
1.3.1 取材动物年龄与部位
1.3.2 培养中出现的两种类型的星形胶质细胞
1.3.3 星形胶质细胞的纯化
1.4 小结
二、星形胶质细胞OGD/R损伤模型的建立
2.1 对象和方法
2.1.1 主要仪器及试剂
2.1.2 星形胶质细胞OGD
2.1.3 星形胶质细胞OGD/R
2.1.4 MTT比色法检测细胞活性
2.1.5 LDH漏出检测
2.1.6 细胞水肿的形态学观察
2.1.7 Western blotting检测AQP4蛋白表达
2.1.8 实验数据的处理与统计学分析
2.2 结果
2.2.1 OGD时间对星形胶质细胞的影响作用实验
2.2.2 OGD/R对星形胶质细胞AQP4表达及水肿的影响作用
2.3 讨论
2.3.1 细胞氧糖剥夺后再灌注时间点的选择
2.3.2 OGD/R过程细胞水肿的形成
2.3.3 OGD/R对星形胶质细胞AQP4的影响
2.3.4 OGD/R所致的细胞水肿与AQP4表达的关系
2.4 小结
三、孕酮对OGD/R损伤的AC细胞AQP4的影响及机制
3.1 对象和方法
3.1.1 主要仪器及试剂
3.1.2 细胞分组及处理因素
3.1.3 MTT法细胞活性检测
3.1.4 LDH漏出检测
3.1.5 细胞水肿的形态学观察
3.1.6 Western blotting检测AQP4、PKC的蛋白表达
3.1.7 免疫荧光表达检测
3.1.8 实验数据的处理与统计学分析
3.2 结果
3.2.1 不同剂量孕酮对OGD4/R24细胞的影响实验
3.2.2 孕酮对OGD4/R24细胞作用的信号转导机制实验
3.3 讨论
3.3.1 孕酮干预剂量的选择
3.3.2 孕酮通过调控AQP4缓解脑水肿
3.3.3 PKC在缺血再灌注后的变化
3.3.4 PKC对AQP4表达的调控
3.3.5 PKC介导的孕酮抑制AQP4表达的作用
3.3.6 孕酮的作用途径及其受体
3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
综述参考文献
致谢
本文编号：3865537
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
研究现状、成果
研究目的、方法
一、大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及鉴定
1.1 对象和方法
1.1.1 大鼠星型胶质细胞原代培养
1.1.2 星形胶质细胞GFAP免疫细胞化学染色
1.1.3 星形胶质细胞HE染色
1.1.4 形胶质细胞生长曲线测定
1.2 结果
1.2.1 原代培养星形胶质细胞镜下形态观察
1.2.2 星形胶质细胞GFAP免疫细胞化学染色
1.2.3 星形胶质细胞HE染色
1.2.4 星形胶质细胞生长曲线测定
1.3 讨论
1.3.1 取材动物年龄与部位
1.3.2 培养中出现的两种类型的星形胶质细胞
1.3.3 星形胶质细胞的纯化
1.4 小结
二、星形胶质细胞OGD/R损伤模型的建立
2.1 对象和方法
2.1.1 主要仪器及试剂
2.1.2 星形胶质细胞OGD
2.1.3 星形胶质细胞OGD/R
2.1.4 MTT比色法检测细胞活性
2.1.5 LDH漏出检测
2.1.6 细胞水肿的形态学观察
2.1.7 Western blotting检测AQP4蛋白表达
2.1.8 实验数据的处理与统计学分析
2.2 结果
2.2.1 OGD时间对星形胶质细胞的影响作用实验
2.2.2 OGD/R对星形胶质细胞AQP4表达及水肿的影响作用
2.3 讨论
2.3.1 细胞氧糖剥夺后再灌注时间点的选择
2.3.2 OGD/R过程细胞水肿的形成
2.3.3 OGD/R对星形胶质细胞AQP4的影响
2.3.4 OGD/R所致的细胞水肿与AQP4表达的关系
2.4 小结
三、孕酮对OGD/R损伤的AC细胞AQP4的影响及机制
3.1 对象和方法
3.1.1 主要仪器及试剂
3.1.2 细胞分组及处理因素
3.1.3 MTT法细胞活性检测
3.1.4 LDH漏出检测
3.1.5 细胞水肿的形态学观察
3.1.6 Western blotting检测AQP4、PKC的蛋白表达
3.1.7 免疫荧光表达检测
3.1.8 实验数据的处理与统计学分析
3.2 结果
3.2.1 不同剂量孕酮对OGD4/R24细胞的影响实验
3.2.2 孕酮对OGD4/R24细胞作用的信号转导机制实验
3.3 讨论
3.3.1 孕酮干预剂量的选择
3.3.2 孕酮通过调控AQP4缓解脑水肿
3.3.3 PKC在缺血再灌注后的变化
3.3.4 PKC对AQP4表达的调控
3.3.5 PKC介导的孕酮抑制AQP4表达的作用
3.3.6 孕酮的作用途径及其受体
3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
综述参考文献
致谢
本文编号：3865537
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