MiR-214-3p调控胶质细胞CTSB蛋白影响多巴胺能神经元活力的研究

发布时间：2023-12-11 20:52

　　研究背景与目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病,平均发病年龄60岁,60岁以上发病率约1%,全球已有超500万患者。PD的主要临床症状有静止性震颤、运动迟缓、肌强直、步态和姿势平衡障碍等,发病后期可致残。PD的主要病理改变是中脑黑质部中多巴胺(DA)能神经元死亡。PD是由多种因素引起的疾病,它与遗传因素、环境因素、年龄、线粒体、自噬等相关,但其具体的病因及其机制目前还未完全明确,有待深入研究。目前临床上仍然没有有效的方法进行PD的早期诊断,因此研究PD的发病机制对于PD的诊断和治疗是至关重要的。炎症参与了PD的发病,而胶质细胞的组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)参与了神经系统炎症的发生发展,所以CTSB可能参与PD的发生发展。MicroRNAs(miRNAs)是一种内源性的长度21-23个核苷酸单链小分子RNA,它通过与靶基因信使RNA(mRNA)的3′非翻译区(3′UTR)结合诱导沉默复合体降解mRNA或阻碍其翻译,对真核细胞的基因表达、细胞发育分化和个体发育等多方面起调控作用。有研究发现PD患者血清中miR-214...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
英文缩略索引表
前言
第一部分 miR-214-3p可结合CTSBmRNA的3′UTR
    1.材料和方法
        1.1 主要材料
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 主要仪器和设备
        1.4 试验方法
            1.4.1 细胞培养
            1.4.2 细胞转染
            1.4.3 荧光素检测
    2.结果
        2.1 miR-214-3p的Mimics、NC、Inhibitor及InhibitorNC的序列
        2.2 miR-214-3p调控的基因
        2.3 miR-214-3p调控的特点
        2.4 荧光素酶报告基因的结果
    3.讨论
    4.结论
第二部分 miR-214-3p调控胶质细胞(小胶质细胞和星形胶质细胞)CTSB蛋白影响多巴胺能神经元活力的研究
    1.材料和方法
        1.1 实验材料与仪器
            1.1.1 主要材料
            1.1.2 仪器设备及厂家
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 实验方法
            1.3.1 细胞培养
            1.3.2 细胞处理
            1.3.3 WesternBlotting
            1.3.4 BV2 细胞总 RNA 提取
            1.3.5 RNA定量及纯度测定
            1.3.6 miR的cDNA第一链合成
            1.3.7 mRNA的cDNA第一链合成
            1.3.8 引物设计与合成
            1.3.9 miR的实时荧光定量PCR
            1.3.10 mRNA的实时荧光定量PCR
            1.3.11 细胞活力检测
    2.结果
        2.1 miR-214-3p对BV2细胞和U87MG细胞内源性蛋白的调控
        2.2 MPP⁺对BV2细胞和U87MG细胞内源性蛋白的影响
        2.3 MPP⁺对BV2细胞和U87MG细胞RNA的影响
        2.4 MPP⁺与miR-214-3pMimics共同对BV2细胞和U87MG细胞内源性蛋白的影响
        2.5 MPP⁺与miR-214-3pMimics共同对BV2细胞和U87MG细胞RNA的影响
        2.6 MPP⁺与miR-214-3pMimics与BV2细胞和U87MG细胞共培养后CM对SH-SY5Y细胞活力的影响
    3.讨论
    4. 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3873350