酪氨酸激酶c-Abl在1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的小鼠黑质多巴胺能神经元自噬抑制中的机制

发布时间：2024-01-08 17:55

　　背景帕金森病(PD)是一种常见运动障碍性疾病,在中老年人中高发。目前PD的治疗方法与效果有限,尚未有根治的方法。随着我国乃至全球人口老龄化日趋严重,PD严重威胁人们的健康和生活质量。迄今为止,虽然已大量的研究表明帕金森的发病与自噬的异常有关,但是其具体机制尚未完全清楚。酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成激酶GSK3β在细胞中调控着多种信号通路的信号转导,影响多种细胞活动的进程。在体内外PD模型和PD患者脑标本中均有发现,酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成蛋白GSK3β的活性异常增加。另外,有研究发现在PD模型中c-Abl与自噬的异常相关,但是二者间存在何种具体联系尚不清楚。也有研究报道GSK3β可以调控TFEB(调控大多数自噬和溶酶体相关基因的转录因子),影响阿茨海默病和胰腺癌的进程,但是在PD尚未有报道。而在AD模型中,干扰c-Abl可影响GSK3β的活性,但没有更多的研究探讨它们的关系。因此阐明在PD中GSK3β、c-Abl与自噬相互之间的联系以及机制具有重要的意义,为帕金森病的防治和治疗药物的开发提供理论基础和新的思路。目的1.探索MPP+诱导神经元死亡和抑制自噬的的机制;2.明确c-A...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1 实验材料
        1.1 主要试剂
        1.2 细胞株、质粒、干扰片段
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 SN4741细胞的培养
        2.2 细胞转染
        2.3 CCK8实验检测SN4741细胞活力
        2.4 质粒转化、扩增及提取
        2.5 细胞免疫荧光染色
        2.6 溶酶体荧光染色
        2.7 Western Blot(免疫印迹)
        2.8 免疫共沉淀(Co-IP)
        2.9 目的基因转录水平的测定
        2.10 大鼠中脑多巴胺能神经元原代培养
        2.11 统计学处理
结果
    1 MPP⁺导致SN4741细胞活力下降,并抑制自噬溶酶体途径的功能
        1.1 MPP⁺诱导SN4741细胞活力下降
        1.2 MPP⁺抑制SN4741细胞的自噬水平和溶酶体生成
        1.3 MPP⁺导致核内TFEB减少进而从转录水平抑制自噬和溶酶体生成
    2 MPP⁺处理SN4741细胞导致c-Abl激活
    3 抑制c-Abl可恢复MPP⁺导致的自噬和溶酶体生成的抑制
    4 抑制c-Abl可恢复MPP⁺导致的核内TFEB的减少
    5 MPP⁺处理下c-Abl可磷酸化GSK3β-Tyr216位点使其活性增强
        5.1 MPP⁺处理SN4741细胞导致GSK3 β的活性增强
        5.2 抑制c-Abl可减少MPP+导致的GSK3β-Tyr216磷酸化
        5.3 c-Abl激动剂DPH可诱导GSK3β-Tyr216磷酸化
        5.4 c-Abl可与GSk3β相互结合,MPP⁺处理使二者相互结合增加
    6 MPP⁺诱导的GSK3β-Y216磷酸化并非由HSP90介导的自磷酸化所引起
    7 MPP⁺处理下抑制GSK3β可恢复TFEB介导的自噬和溶酶体生成
        7.1 MPP⁺处理下抑制GSK3β可恢复核内TFEB的水平
        7.2 MPP⁺处理下抑制GSK3β可恢复自噬和溶酶体生成
    8 MPP⁺处理下抑制c-Abl/GSK3β后所恢复的自噬和溶酶体生成对SN4741细胞有保护作用
讨论
结论
    一、本文主要研究结果
    二、待深入探讨的问题
参考文献
致谢
硕士阶段发表论文



本文编号：3877380