MiRNA-22在髓母细胞瘤病理发生中的作用与机理研究

发布时间：2024-01-26 20:18

　　目的:构建miRNA-22慢病毒表达载体,上调(up-regulation)其在髓母细胞瘤细胞系DAOY和ONS-76中的表达。分析与miRNA-22分子结合靶基因的表达情况(如Casepase-3),观察髓母细胞瘤细胞(DAOY,ONS-76)增殖(MTT实验)、凋亡(流式细胞仪检测实验)等情况,阐明miRNA-22分子在髓母细胞瘤病理发生学中的作用机理。方法:1.慢病毒载体构建:构建miRNA-22真核表达质粒,设计合成miRNA-22特异性RNA序列,用于RNAi实验。2.细胞培养:选定二株髓母细胞瘤细胞系(DAOY,ONS-76)进行培养。3.转染实验:将含有miRNA-22的慢病毒以及空载体病毒转入上述细胞系,用以进行下一步的实验。4.Western blot实验:转染后,上述细胞则分别变为空载体组(DAOY-K,ONS-76-K)以及转入基因组(DAOY-Z,ONS-76-Z)。分别提取各组细胞蛋白,用Western blot技术,测定其Casepase-3的表达量。5.DAOY-K和DAOY-Z进行MTT实验,观察其生长增殖生长情况。6.DAOY-K和DAOY-Z进行流式...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
材料方法
    2.1 构建Has-mir-22过表达的慢病毒载体质粒
        2.1.1 实验仪器与试剂
        2.1.2 实验方法
    2.2 髓母细胞瘤细胞系(DAOY,ONS-76)的培养
        2.2.1 实验试剂和设备
        2.2.2 实验方法和步骤
        2.2.3 实验结果
    2.3 Has-mir-22过表达的慢病毒载体质粒和空载体慢病毒转染髓母细胞瘤细胞系DAOY和ONS-76
        2.3.1 实验试剂和仪器
        2.3.2 实验方法
        2.3.3 实验结果
    2.4 检测DAOY-K,DAOY-Z和ONS-76-K和ONS-76-Z的Caspase-3蛋白的表达
        2.4.1 实验试剂和仪器
        2.4.2 实验方法(含自配试剂)
        2.4.3 实验结果及统计处理
    2.5 髓母细胞瘤细胞系DAOY-K,DAOY-Z的MTT实验
        2.5.1 实验试剂和仪器
        2.5.2 实验方法
        2.5.3 实验结果
    2.6 DAOY-K和DAOY-Z的流式细胞仪凋亡检测
        2.6.1 实验试剂或仪器
        2.6.2 实验方法
        2.6.3 实验结果
讨论
    3.1 MiRNA的概述
        3.1.1 MiRNA的生成和结构
        3.1.2 MiRNA的功能
    3.2. MiRNA与髓母细胞瘤
        3.2.1 髓母细胞瘤相关miRNA的研究现状
        3.2.2 MiRNA-22与髓母细胞瘤临床诊断及预后
        3.2.3 MiRNA和临床治疗
    3.3 miRNA-22参与髓母发生的机制研究
创新性
限制性
结论
参考文献
综述 髓母细胞瘤相关miRNA的研究进展
    参考文献
英文缩略词
攻读学位期间研究成果
致谢



本文编号：3885628