P2X4R基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的小胶质细胞炎性损伤的影响

发布时间：2024-02-18 05:29

　　目的神经退行性疾病为当前中枢神经系统疾病的研究热点,近年来的研究集中在免疫反应和炎性机制对其发生发展的影响,特别是细胞免疫和体液免疫介导的炎性反应,其机制不仅涉及到神经元细胞,更多的表现在中枢系统中的小胶质细胞中。本文中探讨使用慢病毒(LV-P2rx4)沉默P2X4基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的活化状态小胶质细胞炎性损伤的影响。方法首先进行感染预实验,确定慢病毒感染BV2小胶质细胞的最佳感染条件。后取处于对数生长期的BV2小胶质细胞用于实验,采用脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)双信号干预,建立NLRP3炎性小体活化的模型。按照不同干预方法将BV2小胶质细胞随机分为6组:空白对照组、活化模型组、目的基因阴性对照组、目的基因阴性对照+活化模型组、空载病毒阴性对照组、空载病毒阴性对照+活化模型组。上述细胞处理后,应用Real time PCR和Western blots法分别检测提取的RNA和蛋白中NLRP3、TNF-α的mRNA及蛋白的相对表达。结果如下:1.慢病毒(LV-P2rx4)感染BV2小胶质细胞预实验电镜下荧光结果显示:加入50μg·mL^-1

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
实验材料与方法
    1 细胞实验
    2 慢病毒感染细胞预实验
    3 敲除P2X4R基因的慢病毒筛选
    4 正式感染细胞实验
    5 Real time PCR检测NLRP3、TNF-α的mRNA表达水平
    6 Western blots免疫印迹分析NLRP3、TNF-α蛋白表达水平
    7 统计学处理
实验结果
    1 慢病毒预感染实验结果
    2 敲除P2X4R基因的慢病毒筛选实验结果
    3 各组细胞NLRP3和TNF-αmRNA的相对表达量比较
    4 各组细胞NLRP3、TNF-α蛋白相对表达量比较
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢



本文编号：3901983