基于miR-92a-3p调控紧密连接探讨24-乙酰泽泻醇A改善脑微血管内皮细胞OGD/R损伤

发布时间：2024-03-05 01:03

　　目的:通过建立小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧糖剥夺/再复氧(OGD/R)模型,探讨24-乙酰泽泻醇A对OGD/R损伤bEnd.3细胞的保护作用及其与miR-92a-3p的关系。方法:1.24-乙酰泽泻醇A对OGD/R损伤bEnd.3细胞的保护作用研究(1)采用缺氧培养箱建立OGD/R模型,用cck8法检测不同缺氧时间bEnd.3细胞的活性,选择相对活性50%-60%作为造模条件。(2)检测1mg/L、10mg/L和20mg/L的24-乙酰泽泻醇A对OGD/R损伤bEnd.3细胞形态及活性的影响;一氧化氮试剂盒、乳酸脱氢酶试剂盒分别检测NO和LDH;ELISA试剂盒检测24-乙酰泽泻醇A对TNF-α和IL-1β的影响;western bolt检测紧密连接蛋白(claudin-5、occludin、ZO-1)的表达,探讨24-乙酰泽泻醇A对OGD/R损伤细胞是否有保护作用。(3)通过qPCR检测24-乙酰泽泻醇A对OGD/R损伤细胞miR-92a-3p和miR-92a-1-5p表达的影响。通过Targetscan7.2和miRDB数据库寻找miR-92a-3p可能靶基因,进一步探讨...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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英文缩略词
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 24-乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞的保护作用研究
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验仪器
        1.3 实验试剂
        1.4 药物及主要试剂配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养、传代、冻存、复苏
        2.2 模型建立及实验分组
        2.3 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞活性的影响
        2.4 酶联免疫反应(ELISA)法检测培养上清TNF-α和IL-1β含量
        2.5 检测细胞上清NO、LDH的含量
        2.6 western blot检测claudin-5、occludin、ZO-1 蛋白表达
        2.7 qPCR法检测miR-92a-3p和miR-92a-1-5p的表达水平
    3 统计分析
    4 实验结果
        4.1 OGD/R 对 b End.3 细胞活性的影响
        4.2 24-乙酰泽泻醇 A 对 b End.3 细胞活性的影响
        4.3 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞形态及活性的影响
        4.4 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞NO的影响
        4.5 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞LDH的影响
        4.6 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞相关炎性因子的影响
        4.7 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞紧密连接蛋白表达的影响
        4.8 24 -乙酰泽泻醇A对 OGD/R损伤b End.3 细胞miR-92a-3p和 miR-92a-1-5p表达的影响
第二部分 MicroRNA-92a-3p对 OGD/R损伤脑微血管内皮细胞的调控作用研究
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验仪器
        1.3 实验试剂
        1.4 20μmol mi RNA储存液配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养、传代、冻存
        2.2 模型建立、细胞转染及分组
        2.3 miR-92a-3p转染对OGD/R损伤b End.3 细胞活性的影响
        2.4 检测细胞上清NO、LDH的含量
        2.5 western blot检测claudin-5、occludin、ZO-1 蛋白表达
        2.6 miR-92a-3p预测靶基因的验证
    3 统计分析
    4 结果
        4.1 miR-92a-3p mimics和miR-92a-3p inhibitor转染细胞后miR-92a-3p的表达
        4.2 miR-92a-3p转染对OGD/R损伤b End.3 细胞活性的影响
        4.3 miR-92a-3p转染对OGD/R损伤b End.3 细胞NO的影响
        4.4 miR-92a-3p转染对OGD/R损伤b End.3 细胞LDH的影响
        4.5 miR-92a-3p转染对OGD/R损伤b End.3 细胞紧密连接蛋白的影响
        4.6 miR-92a-3p调节occludin和ZO-1 的表达
讨论
    1 24-乙酰泽泻醇A对紧密连接的保护作用
    2 24-乙酰泽泻醇A的抗炎作用
    3 24-乙酰泽泻醇A调节NO的合成和LDH的溢出
    4 miR-92a-3p的调控作用
结论
不足和展望
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3919440