GLP-2对LPS诱导的小胶质细胞活化的影响及机制

发布时间：2017-05-24 23:00

  本文关键词：GLP-2对LPS诱导的小胶质细胞活化的影响及机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：帕金森疾病(Parkinson Disease,PD)是一种常见的神经组织退行性疾病。PD的主要病因是中脑黑质区多巴胺神经元的大量损失,其主要特征包括短暂运动迟缓,肌肉僵直,脚步混乱等。近年来越来越多针对PD的研究表明神经炎症反应在PD的发生发展中起到至关重要的作用。在神经炎症发生过程中小胶质细胞是主要的效应细胞,研究中发现过度活化的小胶质细胞会产生大量的促炎因子,这些具有神经毒性的炎性因子会大量产生并累积,从而导致中脑内炓质区中的多巴胺神经元选择性死亡进而引起PD的发生。尽管目前我们已经明确神经炎症反应与PD的发病机理有关,但其作用机制尚不清楚。因此,抑制神经炎症反应的发生可能在治疗PD的过程中成为一处关键环节。三十三个氨基酸组成的胰高血糖素样肽-2(GLP-2)是来源于肠粘膜内分泌L细胞的一类多肽物质。这种小分子多肽主要分布于回,结肠部位内。GLP-2可以经由其受体GLP-2R所介导发挥多种生物学特性及作用,如促进正常小肠保护、修复受到损伤的肠粘膜,促进肠粘膜生长及发育及增加肠道的血液流量等。这其中就包括有效的抑制炎症作用。近年来发现其在外周起到非常重要的抗炎作用。更有研究表明其对于活化后的腹腔巨噬细胞有明显的抗炎作用。另外,最新的研究成果发现GLP-2在脑的多个部位有表达。本实验探究了GLP-2对活化后的小胶质细胞系BV-2的抗炎作用及其作用机制。以期揭示GLP-2对于神经炎症乃至PD的潜在治疗作用。首先利用不同浓度的GLP-2(10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)M)预处理BV-2细胞1 h,然后由脂多糖(LPS)进行刺激,收集细胞培及养上清提取RNA和蛋白样品。利用荧光定量RT-PCR方法检测促炎酶类(i NOS和COX-2)以及促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)基因水平变化;利用ELISA方法检测促炎细胞因子蛋白水平变化;利用Western blotting方法检测促炎酶类蛋白表达水平变化。然后利用PCR检测BV-2中是否存在GLP-2受体-GLP-2R,之后利用Western blotting检测了两条关键炎症信号通路MAPKs和NF-κB中关键因子的磷酸化水平以研究GLP-2发挥抗炎功能的机理。结果表明GLP-2能显著抑制BV-2细胞中LPS诱导的i NOS、COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-α基因和蛋白水平的增加。通过PCR检测BV-2后发现该小胶质细胞系中并不存在GLP-2受体(GLP-2R)的表达。利用Gαs蛋白偶联受体阻断剂NF449处理BV-2后能够明显抑制GLP-2的抗炎作用。Western blotting结果显示GLP-2在BV-2细胞中能降低LPS诱导的ERK1/2、JNK1/2以及p65的磷酸化水平,然而对p38的磷酸化水平没有影响。以上结果说明GLP-2是通过调节MAPK信号通路中的ERK、JNK及NF-κB信号通路中的的p65的磷酸化水平来抑制小胶质细胞活化从而达到抑制炎症的作用。
【关键词】：帕金森病 神经炎症 小胶质细胞 GLP-2 LPS
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 前言13-15
• 第一篇 文献综述15-29
• 第一章 GLP-215-22
• 1 前言15-16
• 2 GLP-2 肠道产生的神经信号肽16
• 3 GLP-2 在胃肠道中的作用16-18
• 4 GLP-2 与肠道神经系统中炎症反应18-19
• 5 GLP-2 的创新前景19-21
• 6 总结21-22
• 第2章 帕金森疾病中的神经炎症和小胶质细胞22-29
• 1 帕金森病中的神经炎症22-26
• 2 帕金森病中的小胶质细胞26-29
• 第二篇 研究内容29-54
• 第1章 GLP-2 对LPS诱导的小胶质细胞系BV-2 中促炎酶类和促炎细胞因子的影响29-43
• 1 实验材料及实验方法30-38
• 2 实验结果38-40
• 3 讨论40-42
• 4 小结42-43
• 第2章 GLP-2R在GLP-2 抗炎功能中的作用43-49
• 1 实验材料与方法43-45
• 2 实验结果45-47
• 3 讨论47-48
• 4 结论48-49
• 第3章 GLP-2 抑制LPS诱导BV-2 细胞中MAPKS和NF-ΚB信号通路的影响49-54
• 1 实验材料与方法49-51
• 2 结果51-52
• 3 讨论52-53
• 4 小结53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-67
• 导师简介67-68
• 作者简介68-69
• 致谢69

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本文编号：392156