MiR-512-5p靶向JAG1抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞

发布时间：2024-04-11 22:50

　　MicroRNAs(miRNAs)是一种非编码的小RNA,在转录和翻译过程中抑制基因表达,其失调可导致肿瘤发生。我们发现miR-512-5p在胶质母细胞瘤中低表达,因此我们使用qRT-PCR和FISH检测了miR-512-5p在胶质瘤组织中的表达。然后,我们使用CCK-8、平板克隆、EdU分析以及流式细胞术检测miR-512-5p在U87和T98细胞中的过表达效果。Jagged1(JAG1)经荧光素酶报告基因和Western blotting实验验证为miR-512-5p的下游靶基因。通过Western blotting、CCK-8、平板克隆、EdU等检测以及流式细胞术检测JAG1对胶质瘤细胞的影响。在功能恢复实验中,我们发现JAG1过表达逆转了miR-512-5p的作用。体内实验显示,miR-512-5p抑制肿瘤生长,延长裸鼠的总体生存时间,降低JAG1、CD31和Ki67蛋白水平。我们认为miR-512-5p是胶质瘤分子治疗的新靶点。MiR-512-5p首先通过抑制JAG1抑制胶质瘤的增殖,还可诱导细胞周期阻滞,从而发挥肿瘤抑癌基因的重要作用。

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【部分图文】：

图1(A)CCGA数据库中验证miR-512-5p的表达

谋泶锼?较宰诺陀诘图侗鸾褐柿觯╓HOII和WHOI）（图1A）。MiR-512-5p在胶质瘤组织中显著低表达和非肿瘤脑组织相比。同时，高

图2(A)qRT-PCR分析转染miR-512-5p或miR-NC慢病毒后U87和T98细胞中miR-512-5p的表达水平

第3章实验结果级别胶质瘤组织中miR-512-5p表达水平明显低于低级神经胶质瘤组织（图1B）。此外，我们选择正常人星形胶质细胞（NHAs）和5个胶质母细胞瘤细胞系来评估miR-512-5p的表达水平，发现miR-512-5p在U87和T98胶质瘤细胞....

图4(A)Westernblot分析转染si-JAG1后U87和T98细胞中JAG1、CDK4、CDK6和CyCD1的表达情况

第3章实验结果（图3A）。通过荧光素酶报告基因实验，发现野生型的相对荧光素酶活性显着降低，然而突变体未显示任何显着变化（图3B）。我们使用Pearson检验进一步验证了JAG1与miR-512-5p的关联，发现JAG1表达与miR-512-5p表达呈负相....

图5(A-C)CCK-8检测将JAG1-cDNA或JAG1-NC转入miR-512-5p或miR-NC慢病毒转染细胞系中胶质瘤细胞增殖能力的改变(D-F)EdU检测JAG1-cDNA或JAG1-NC转染后U87和T98细胞增殖能力的改变

第3章实验结果我们使用小干扰RNA，si-JAG1转染U87和T98细胞，Westernblot显示siJAG1转染后的细胞中JAG1蛋白表达降低（图4A）。我们在细胞功能实验上进一步分析了JAG1在U87和T98细胞中的作用。通过CCK....

本文编号：3951263