高原环境下钙结合蛋白S100B及S100A4对成年大鼠海马齿状回神经干细胞增殖分化的影响

发布时间：2017-05-26 18:01

  本文关键词：高原环境下钙结合蛋白S100B及S100A4对成年大鼠海马齿状回神经干细胞增殖分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察高原低压缺氧环境对大鼠海马齿状回神经发生的影响,探索低氧脑损伤后神经发生和神经功能修复的机制,为临床治疗中枢神经系统损伤类疾病提供实验依据。方法:120只健康成年雄性SD大鼠,随机分为两组:模拟海拔5000米组、气压52.9千帕(实验组)和海拔2200米组、气压77.406千帕(对照组)。实验组经模拟海拔5000米低压氧舱处理3天,低压缺氧3天后进入修复期,转移至海拔2200米环境下饲养,对照组不经模拟海拔5000米低压氧舱预处理,直接在海拔2200米环境饲养。两组又分为缺氧损伤后低海拔环境修复1、3、7、14、28天五个亚组,每组12只。在相应时间点行脑组织取材。分别采用H-E染色、Nissl染色观察脑组织形态学的变化;采用Brd U标记,免疫组化染色检测Brd U阳性细胞表达,观察神经干细胞增殖能力变化;免疫荧光双标检测Brd U和DCX、GFAP的共表达,观察神经干细胞的分化能力;采用免疫组化染色检测钙结合蛋白家族S100B(S100蛋白家族B)、S100A4(S100蛋白家族A4)阳性表达细胞的分布和数量变化;并采用q RT-PCR检测S100B、S100A4基因表达情况。结果:(1)H-E染色结果显示,对照组相比较,实验组在缺氧损伤后1天至3天,海马颗粒细胞损伤明显,出现形态不规则的异性细胞或呈空泡状的细胞,并出现核浓缩的凋亡细胞。Nissl染色结果显示,与对照组相比较,1天、3天及7天实验组大鼠海马区变性/坏死细胞明显增多(p0.05),神经细胞数量减少、细胞排列较紊乱,可观察到深染的变性细胞。(2)Brd U免疫组化染色结果:实验组Brd U阳性细胞数在低压缺氧损伤后第7、14、28天明显高于对照组对应时间点(p0.05)。(3)Brd U/DCX和Brd U/GFAP免疫荧光双标结果:高海拔环境中,低氧损伤后海马齿状回存在DCX和GFAP阳性细胞表达。(4)S100B免疫组化染色结果:实验组S100B蛋白的表达在低压缺氧损伤后第1、3天明显高于对照组对应时间点(p0.05),其他时间点S100B蛋白表达量无统计学差异,S100B蛋白的表达和海马形态组织结构损伤的程度基本相一致。(5)S100A4免疫组化染色结果:实验组S100A4蛋白的表达在低压缺氧损伤后第3、7、14天明显高于对照组对应时间点(p0.05),28天组蛋白表达量无统计学差异,和神经干细胞增殖的时间点基本一致(6)q RT-PCR检测S100B、S100A4基因表达,结果显示,实验组S100A4基因在低氧损伤后3天、7天、14天组表达明显高于对照祖(p0.05);实验组S100B基因在低氧损伤后1天、3天组表达明显高于对照组(p0.05)。结论:1、高海拔低压缺氧刺激,激活大鼠海马齿状回颗粒细胞下层的神经干细胞增殖。2、低压缺氧脑损伤后大鼠海马齿状回增殖的神经干细胞可以分化为神经元或神经胶质细胞。3、高海拔低压缺氧刺激可诱导钙结蛋白S100B和S100A4蛋白表达上调,过度表达的S100B通过激活一定的信号途径,参与诱导海马细胞损伤或凋亡;但高表达的钙结合蛋S100A4可能参与海马神经干细胞的增殖和分化进程。
【关键词】：低压缺氧 大鼠 海马 S100B S100A4 神经干细胞
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩写一览表11-12
• 第1章 前言12-15
• 第2章 材料与方法15-30
• 2.1 实验材料和仪器15-17
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 实验试剂15-16
• 2.1.3 实验器材16-17
• 2.2 方法17-21
• 2.2.1 高原缺氧模拟条件17
• 2.2.2 动物分组17
• 2.2.3 BrdU标记17-18
• 2.2.4 实验相关试剂的配置18-20
• 2.2.5 组织取材20
• 2.2.6 脑组织石蜡切片的制备20-21
• 2.3 形态学及分子学水平研究21-29
• 2.3.1 HE染色21-22
• 2.3.2 Nissl染色22
• 2.3.3 免疫组织化学染色22-25
• 2.3.4 免疫荧光组织化学染色25-26
• 2.3.5 RT-PCR检测S100B、S100A4、HIF-1ɑ 基因表达水平26-29
• 2.4 统计学处理29-30
• 第3章 结果30-42
• 3.1 高原缺氧损伤模型的建立30
• 3.2 低压缺氧环境下海马齿状回形态学变化30-32
• 3.2.1 HE染色观察30-31
• 3.2.2 Nissl染色观察31-32
• 3.3 低压缺氧环境下海马齿状回神经干细胞的增殖和分化32-35
• 3.3.1 BrdU免疫组织化学染色观察32-33
• 3.3.2 免疫荧光组织化学染色观察33-35
• 3.4 低压缺氧环境下海马齿状回S100A4 和S100B的表达35-42
• 3.4.1 成年大鼠S100B、S100A4mRNA Real-time PCR结果35-37
• 3.4.2 不同海拔条件下S100B表达量比较分析37
• 3.4.3 不同海拔条件下S100A4 表达量比较分析37-38
• 3.4.4 S100B免疫组织化学染色观察38-40
• 3.4.5 S100A4 免疫组织化学染色观察40-42
• 第4章 讨论42-45
• 第5章 结论45-46
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 综述50-62
• 参考文献57-62
• 作者简介62

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 胡志梅;梁玉;刘皓;陈祖培;;碘过量对成年大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白的影响[J];中国地方病防治杂志;2007年02期

2 邵建林;梁荣毕;王雁;刘曼;衡新华;罗用宇;;七氟烷保护脑缺血-再灌注损伤大鼠海马机制的研究[J];中国医药导刊;2008年09期

3 邵淑红;李尊岭;潘芳;;差异性应激对青、老年大鼠海马HSP70 mRNA表达的影响[J];中国老年学杂志;2010年02期

4 王顺旺;徐平;刘海军;陈群;刘艳芳;张丽;龚其海;李彬;;反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)致痴大鼠海马诱导型一氧化氮合酶表达的影响[J];重庆医学;2010年18期

5 王国明;朱建忠;陈俊荣;李积胜;张戟风;周红军;;牛磺酸锌对慢性氟接触大鼠海马的保护性研究[J];工业卫生与职业病;2012年03期

6 秦文熠;罗勇;余超;;电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马内白介素-1β及转录核因子κB抑制蛋白激酶的影响[J];针刺研究;2013年04期

7 朱蕙霞,陈蓉,金国华,秦建兵,田美玲;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用[J];南通医学院学报;2003年04期

8 谭吉林,李国辉,陈惠,刘杏琴,孙立,郑士富;复聪灵片对拟血管性痴呆大鼠海马区体视学参数的影响[J];中药材;2004年01期

9 怡悦;柴胡加龙骨牡蛎汤对大鼠海马过度释放谷氨酸的抑制作用[J];国外医学(中医中药分册);2005年05期

10 胡志梅;梁玉;刘皓;陈祖培;;碘过量对成年大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白影响的实验研究[J];河北医学;2006年12期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 史艳红;徐平;宋凯英;潘成玉;;阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠海马损害及其机制的研究[A];贵州省第六届中西医结合神经科学术年会论文汇编[C];2013年

2 雍政;颜玲娣;周培岚;高翔;宫泽辉;;噻吩诺啡对大鼠海马区突触可塑性的影响[A];第十五届中国神经精神药理学学术会议论文摘要[C];2012年

3 常晓慧;战丽彬;白长川;吴美娟;冯召岚;;组分中药金智达胶囊对2型糖尿病大鼠海马认知功能的改善作用及相关机制的研究[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编[C];2011年

4 王良;董大翠;蔡秋云;朱长庚;;谷氨酸钠致痫大鼠海马mGluR5的表达变化[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

5 戴薇薇;金国琴;张学礼;赵伟康;;左旧丸、右旧丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质含量变化的影响[A];第七次全国中西医结合虚证与老年病学术会议论文摘要集[C];2003年

6 李茂进;谢林;胡俊峰;李国珍;;天麻对铅所致大鼠海马损害的拮抗作用[A];山东预防医学会首届学术年会资料汇编[C];2003年

7 史艳红;徐平;宋凯英;潘成玉;;阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠海马损害机制及其与低氧的相关性[A];贵州省第六届中西医结合神经科学术年会论文汇编[C];2013年

8 冯荣芳;冯亚青;郭振华;邢邯英;李淑琴;;胶质纤维酸性蛋白在老年痴呆大鼠海马中的表达[A];中华医学会第八次全国老年医学学术会议论文汇编[C];2007年

9 刘琼;朱海燕;俞瑾;米文丽;毛应启梁;王彦青;吴根诚;;大鼠海马胶质细胞在抑郁症及电针抗抑郁模型治疗中的作用研究[A];第九届全国针刺麻醉针刺镇痛及针刺调整效应学术研讨会论文集[C];2007年

10 陈琛;朱文荣;耿德勤;;氟西汀+电针治疗对抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响[A];中华医学会第十次全国精神医学学术会议论文汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 ;电针能激活老年痴呆大鼠海马蛋白激酶信号通路[N];中国中医药报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 段开明;异氟烷对成龄和老龄大鼠海马蛋白质组影响的差异性研究[D];中南大学;2007年

2 周爽;电针对高血压性脑出血大鼠海马信号转导机制的影响[D];湖北中医学院;2003年

3 杜会枝;乙酰胆碱酯酶抑制剂和金属离子对大鼠海马细胞膜离子通道的作用研究[D];山西大学;2006年

4 杨惠云;老年性痴呆大鼠海马突触体的蛋白质组学研究[D];天津医科大学;2009年

5 罗松;电针对老年痴呆大鼠海马神经元突触形态可塑性的影响机制[D];成都中医药大学;2003年

6 刘琼;针刺治疗实验性抑郁症时成年大鼠海马神经发生的变化[D];复旦大学;2008年

7 刘雨星;电针对老年性痴呆大鼠海马组织信号转导介质的调节作用研究[D];成都中医药大学;2003年

8 姜硕;电针修复慢性应激致抑郁大鼠海马星形胶质细胞损伤的机理研究[D];广州中医药大学;2013年

9 鲍娟;GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及其抗细胞凋亡机制的研究[D];中南大学;2008年

10 汤慧芹;甲状腺激素对海马内源性生长激素及其受体的调节[D];武汉大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 邹艳萍;归脾汤对抑郁模型大鼠海马形态学及皮质醇水平的影响[D];辽宁中医药大学;2006年

2 董海影;柴胡疏肝散对抑郁模型大鼠海马乙酰胆碱代谢的影响[D];黑龙江中医药大学;2009年

3 贾慧娟;不同游泳运动对大鼠海马cAMP影响的实验研究[D];山西大学;2010年

4 金镇国;电针对脑缺血再灌注大鼠海马区胰岛素样生长因子-1表达的影响[D];湖北中医学院;2005年

5 韩玉霞;绞股蓝皂苷对谷氨酸所致大鼠海马组织损伤的保护作用[D];山东大学;2008年

6 赵衍;氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马组织ERK信号转导通路的研究[D];宁夏医科大学;2010年

7 蒯建科;麻醉药对新生大鼠海马谷氨酸受体及转运体表达和认知功能的影响[D];第四军医大学;2006年

8 敬开权;慢性不可预知温和应激对大鼠海马自噬作用和HMGB1/TLR4通路的影响[D];南华大学;2013年

9 刘国军;NF-κB信号通路中炎症因子在慢性致痫大鼠海马的表达及PDTC干预的研究[D];广西医科大学;2010年

10 谢鑫;慢性铝暴露对大鼠海马LTP的影响及其机制研究[D];辽宁中医药大学;2010年

  本文关键词：高原环境下钙结合蛋白S100B及S100A4对成年大鼠海马齿状回神经干细胞增殖分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：397604