胶质瘤干细胞诱导巨噬细胞癌变的实验研究

发布时间：2024-05-23 05:34

　　第一部分：胶质瘤干细胞体外诱导巨噬细胞癌变的实验研究 目的：将人胶质瘤干细胞与巨噬细胞共培养，观察胶质瘤细胞与巨噬细胞的相互作用及能否诱导后者发生恶性转化，并鉴定其转化后的生物学表型。 方法：取全身表达绿色荧光蛋白的C57BL/6J-NC-GFP裸小鼠，腹腔灌洗得到的巨噬细胞与转红色荧光基因的人胶质瘤干细胞系SU3-RFP直接及间接共培养，建立双色荧光示踪细胞共培养模型，观察胶质瘤干细胞与宿主巨噬细胞相互作用，观察巨噬细胞形态及细胞特性的变化，鉴定其生物学表型的改变。 结果：不论是直接及间接共培养，均可见巨噬细胞受肿瘤刺激后发生形态上的变化。其中直接共培养体系中，早期可见巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬。继续传代培养，巨噬细胞由小圆形逐渐变为长梭形，并可连续传代，生长曲线表明此转化的巨噬细胞具有同SU3细胞相似的生长周期及生长速度，具有恶性转化细胞特性。 结论：体外双色荧光细胞共培养模型中，人胶质瘤干细胞可诱导宿主巨噬细胞恶性转化，值得进一步深入研究。 第二部分：胶质瘤干细胞诱导宿主巨噬细胞癌变的体内研究 目的：肿瘤免疫研究表明，进展期肿瘤组织中的巨噬细胞对肿瘤生长起促进作用，本文旨在探索胶质...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1实验动物-GFP裸鼠A：SPF级GFP裸鼠房；C：GFP裸鼠大体观；D：GFP裸鼠普通光成像；B：GFP裸鼠荧光成像

第一部分：胶质瘤干细胞体外诱导巨噬细胞癌变的实验研究1、实验动物和器材1.细胞系及实验动物来源6～8W龄C57BL/6J-NC-GFP绿色荧光裸小鼠（图1），体质量13～17g，雌拘，由苏州大学SPF级动物房提供[合格证号为SYXK(苏)2007-0035]。....

图2毛细玻璃管

3.毛细玻璃吸管的制备取普通玻璃吸管，酒精灯下加热后将其延长，形成玻璃细丝管，注水验证其通畅性后高压消毒备用（图2）。图2毛细玻璃管2、实验方法1.巨噬细胞取材将GFP裸小鼠脱臼处死，并浸入75％乙醇中3min，然后取出小鼠，仰卧于超净台中的无菌纱布上。用灭菌眼科镊提....

图3SU3和SU3-RFP细胞（相差显微镜所见，比例尺20μm）：SU3在含生长因子条件培养，呈悬浮的球状生长（A）；在含血清条件下培养，呈多形性贴壁生长（B）；转染RFP基因后的SU3-RFP细胞，几乎有100％的RFP基因转染率在相应条件下培养，具有成球（C）和贴壁（D）生长的形态特征

对数生长期的SU3、SU3-ihCMC以0.25%胰酶消化，调整细胞浓度为1x1100ul接种于96孔板内,每个96孔板每种细胞设6个复孔，并设不含细，共设7个96孔板，置37℃，5%CO2细胞培养箱内培养，12小时后，板，每孔加入10ul....

图5SU3-RFP培养液上清刺激后巨噬细胞形态变化（标尺=50μm）：A为SU3-RFP培养液上清培养巨噬细胞一周后的细胞形态（A1：光学显微镜下所见，A2：荧光显微镜下所见）；B为普通培养液培养巨噬细胞一周后的细胞形态（B1：光学显微镜下所见，B2：荧光显微镜下所见）

其中巨噬细胞比例约为99%以上（图4）。A、B分别为C57BL/6J-NC-GFP鼠腹腔灌洗细胞同一视野光学显微镜下（标尺=100光显微镜下（标尺=100μm）所见，B中无绿色荧光的小圆形细胞为红细胞，余类圆形细胞均发绿色荧光。C为灌洗细胞CD68免疫细胞化学....

本文编号：3981071