miR-200a在胶质瘤细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究

发布时间：2024-07-09 04:53

　　目的：研究miR-200a在胶质瘤细胞迁移侵袭中的作用及其机制。 方法：结合本课题组前期的研究结果，利用real-time PCR检测miR-200a在胶质瘤细胞系和组织中的表达；将miR-200a的模拟物及抑制剂转染U87细胞后，进行细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验，分别检测miR-200a对胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。利用在线miRNA靶基因预测软件预测miR-200a的靶基因，并用DAVID在线基因功能软件进行归类分析；利用Westernblot实验和荧光素酶报告系统对所预测的潜在靶基因进行实验验证。 结果：Real-time PCR结果提示，相对于低级别胶质瘤组织和细胞，miR-200a在高级别胶质瘤组织和细胞中显著高表达，差异有统计学意义(P<0.05)，这与本课题组前期的人胶质瘤细胞miRNA芯片结果一致。过表达miR-200a可促进U87细胞的迁移侵袭能力(P<0.05)，而抑制miR-200a的表达则结果相反。过表达或抑制miR-200a对U87细胞增殖能力均无显著影响，差异无统计学意义(P>0.05)。利用DA...

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【学位级别】：硕士

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缩略词表
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前言
第一部分 Real-time PCR 检测 miR-200a 在不同级别胶质瘤细胞和组织中的表达
    1 材料
        1.1 实验材料
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂及常用溶液配制
        1.4 主要试剂的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 胶质瘤细胞和组织的 miRNA 提取、逆转录和 Real-time PCR
    3 结果
第二部分 miR-200a 对 U87 细胞迁移、侵袭及增值的影响
    1 材料
        1.1 实验材料
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂及常用溶液配制
        1.4 主要试剂的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 miR-200a 抑制剂和模拟物转染 U87 细胞
        2.3 Transwell 细胞侵袭和迁移实验
        2.4 划痕实验
        2.5 MTS 检测 miR-200a 对 U87 细胞增值的影响
        2.6 MTS检测miR-200a对U87细胞增值的影响
        2.7 统计学处理
    3 结果
第三部分 miR-200a 的靶基因预测、筛选和验证
    1 材料
        1.1 实验材料
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂及常用溶液配制
        1.4 主要试剂的配制(其余同前)
    2 实验方法
        2.1 miR-200a 的靶基因预测、归类分析
        2.2 Western blot 检测 miR-200a 是否调节目标靶基因蛋白表达
        2.3 使用荧光素酶报告系统分析验证 miR-200a 的潜在靶基因
    3 结果
        3.1 miR-200a的靶基因预测、归类分析
        3.2 Western blot分析验证miR-200a调控靶基因PTEN和NCAM1的蛋白表达
        3.3 使用荧光素酶报告系统分析验证miR-200a的潜在靶基因
讨论
结论
参考文献
致谢
综述
    参考文献



本文编号：4004426