NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

发布时间：2025-02-05 15:10

　　目的：本实验研究环状哑铃形圈套寡核苷酸（Circular dumbbelloligodeoxynucleotides，CD-ODN）转染对核因子-κB （Nuclear factor kappa B，NF-κB）活性和神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及细胞凋亡的影响，进一步检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达情况，探索神经母细胞瘤基因治疗的新靶点。 方法： 电穿孔法将CD-ODN转染神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系，以未转染基因的SK-N-SH细胞为空白对照。本实验大致分三个部分：1、转染CD-ODN后NF-κB活性的变化：免疫激光共聚焦显微镜下观察细胞内NF-κB核转位情况变化；酶联免疫分析法（Enzyme-linked immunoassay，ELISA）检测细胞内NF-κB p65表达的变化。2、转染CD-ODN后SK-N-SH细胞生物活性的变化：四甲基偶氮唑蓝比色法(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)检测转染CD-ODN后SK-N-SH细胞体外增殖活性的变化；流式细胞仪技术（Flow cytometry，FCM）检测转染CD-ODN对SK...

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1退火后CD-ODN环状哑铃形结构示意图

Tween-2020μl加去离子水至20ml)抗体稀释液：10×TBS2ml脱脂奶粉1gTween-2020μl加去离子水至20ml实验步骤和方法）CD-ODN的合成人NF-κB设计的CD-ODN参考文献[14]。-ODN序列：5’-CGGAAAGTC....

图2NF-κBp65表达情况（*示p＜0.05）

图2NF-κBp65表达情况（*示p＜0.05）此结果表明，转染24h后，正常对照组与转染CD-ODN组NF-κBp65的表达差异无明显统计学意义，随着转染时间的延长，48h以及72h后两组结果具有统计学意义，转染CD-ODN组NF-κBp6....

图3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核转位情况（200×）

图3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核转位情况（200×）红色为PI染核，蓝色荧光为DAPI标记的抗NF-κB抗体，紫色荧光为进入细胞核后NF-κB红色荧光与蓝色荧光重叠所致。结果显示实验组CD-ODN细胞无NF-κB....

图4两组细胞体外增殖生长曲线

图4两组细胞体外增殖生长曲线结果显示，实验组SK-N-SH细胞的吸光度值A与空白对照组SK-N-SH细胞之间存在显著性差异（p＜0.05）。以正常SK-N-SH细胞为对照，实验组细胞在第2448和72小时的细胞生长抑制率分别为12%、29%和42%....

本文编号：4030034