MicroRNA-16调控SERT在匹罗卡品慢性癫痫大鼠中的作用和机制研究

发布时间：2017-06-14 14:09

  本文关键词：MicroRNA-16调控SERT在匹罗卡品慢性癫痫大鼠中的作用和机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】通过建立匹罗卡品慢性癫痫大鼠模型,予5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(SSRI)帕罗西汀(Paroxetine)进行干预,观察慢性期痫性发作,采用分子生物学方法检测神经元增殖及凋亡相关蛋白、5-羟色胺转运体(SERT)、micro RNA-16(mi RNA-16)表达情况,探讨SERT及mi RNA-16在匹罗卡品致慢性癫痫大鼠中的作用和可能的调控机制。【方法】1.实验动物分组:成年雄性SD大鼠首先分为两组:空白对照组(Vehicle组,n=6),氯化锂-匹罗卡品模型组(LICL-PILO组,n=30)。模型组根据注射匹罗卡品后是否出现癫痫持续状态(Status Epilepticus,SE)纳入实验,然后随机分为2组:SE+Paroxetine组(腹腔注射帕罗西汀5mg/kg)及SE组(腹腔注射等量生理盐水组)。2.制作LICL-PILO癫痫模型:腹腔注射PILO 30mg/kg(16-18h前腹腔注射氯化锂127mg/kg),30分钟后如无Ⅳ级(按Racine分级标准)以上发作,每隔15分钟注射10 mg/kg追加剂量,直至出现Ⅳ级以上发作方认为癫痫模型成功。3.药物干预:癫痫持续状态模型造模成功后第5周开始腹腔注射帕罗西汀5mg/kg,1次/日,持续4周,采用Veliskova和Goffin.K分级评分法观察癫痫大鼠第5-8周自发性发作。4.取材及指标检测:各实验组在实验第8周后心脏灌注,一部分取海马组织石蜡包埋切片行TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况;另一部分取海马及中缝核标本用于Western-blot检测SERT、bcl-2、BDNF及RT-PCR检测mi RNA-16的表达。【结果】1.行为学改变:(1)造模成功率、存活率:造模成功率77.78%,存活率35.71%。(2)第5-8周模型自发性发作的观察:第5-8周期间观察统计,癫痫大鼠模型自发性发作级数多在Racin I-IV级之间,个别有V级发作,帕罗西汀药物干预组较SE发作级数降低,次数减少,差异均有统计学意义。2.TUNELl/HRP检测结果:(1)造模后海马组织神经元凋亡数目均增多,凋亡细胞显色强度增加;(2)帕罗西汀干预后海马组织神经元凋亡减少,与SE组比较,差异有统计学意义,凋亡显色强度没有区别。3.Western blot法结果显示:(1)与Vehicle组比较,SE组中缝核SERT无统计学意义的差别,海马SERT表达降低,差异有统计学意义;与SE组比较,帕罗西汀干预后,中缝核SERT表达降低,差异有统计学意义,海马SERT表达升高,差异有统计学意义。(2)与Vehicle组比较,造模后海马BDNF、bcl-2蛋白表达降低;与SE组比较,帕罗西汀药物干预后海马bcl-2蛋白表达升高,差异有统计学意义,海马BDNF蛋白有升高趋势,差异无统计学意义。4.RT-PCR结果显示:与Vehicle组比较,造模后SE组中缝核mi RNA-16降低,海马mi RNA-16升高,差异均有统计学意义;与SE组比较,帕罗西汀干预组海马mi RNA-16降低,差别有统计学意义,中缝核mi RNA-16有升高趋势,但差别没有统计学意义。【结论】1.帕罗西汀可以减少慢性癫痫大鼠自发性发作。2.慢性癫痫大鼠中海马神经元细胞凋亡增多,可能与慢性期海马bcl-2蛋白及BDNF表达降低有关;SSRI类药物可能通过提高海马bcl-2、BDNF水平抑制神经元凋亡,促进海马神经元再生。3.慢性癫痫大鼠中海马SERT存在表达异常,SSRI类药物可调节中缝核及海马SERT的表达,为5-HT与癫痫的关系提供生化依据。4.慢性癫痫大鼠中海马及中缝核mi RNA-16存在组织差异性表达变化,应用帕罗西汀干预后可调节mi RNA-16的表达,推测mi RNA-16可能参与调控SERT表达,具体机制有待进一步研究。
【关键词】：慢性癫痫 SERT MicroRNA-16 Bcl-2 BDNF
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 英文缩略词表3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 材料和方法12-24
• 结果24-32
• 讨论32-36
• 结论36
• 参考文献36-43
• 综述43-53
• 参考文献49-53
• 致谢53

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