干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑组织miR-21及Bcl-2表达的影响

发布时间：2017-07-03 18:01

  本文关键词：干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑组织miR-21及Bcl-2表达的影响

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【摘要】：目的:观察移植骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)对SD大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、微小RNA-21(Micro RNA-21,mi R-21)的表达变化,探讨BMSCs治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制是否与上调抗凋亡因子Bcl-2和mi R-21的表达有关。方法:建立大鼠大脑中动脉缺血(Middle cerebral artery occlusion MCAO)再灌注模型。将96只健康SD大鼠随机分为:假手术组(24只),接受造模过程但不行动脉栓塞;模型组(24只)仅接受造模;PBS移植组(24只)移植组造模成功后6h内经尾静脉移植PBS溶液;BMSCs移植组(24只),移植组造模成功后6h内经尾静脉移植BMSCs。观察指标:改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS),Bcl-2蛋白含量(免疫组化法检测),mi R-21表达水平(实时荧光定量法检测)。结果:1.SD大鼠m NSS评分:空白组:0;在12h、1d、3d、7d各时间点,模型组:15.17±3.60、15.50±1.64、14.33±2.16、13.50±3.09;PBS组:15.17±0.75、14.00±2.61、13.17±2.48、13.00±1.40;BMSCs组:14.83±1.33、13.50±2.88、9.33±1.63、6.30±1.21。结果显示:在12h、1d模型组、PBS组和BMSCs组大鼠m NSS评分均无统计学意义(P0.05),随后3d、7d各组分值逐渐减低,BMSCs组减低明显有统计学意义(P0.05);而PBS组、模型组各组前后比较无统计学意义(P0.05);同时间点BMSCs组与PBS组、模型组两组相比差异有统计学意义(P0.01);PBS组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。2.HE染色光镜下显示:空白组,未见明显病理改变,神经细胞数目多、整齐、均匀、形态完整。模型组、PBS移植组:神经细胞大片坏死灶,细胞肿胀、脱失、坏死明显。BMSCs移植组,坏死区域缩小,神经细胞保留较完整,结构尚可。3.脑组织中平均每个视野Bcl-2阳性表达个数:12h、1d、3d、7d各时间点,空白组:5.69±0.56、5.16±0.78、5.43±0.67、5.17±0.66;模型组:24.51±3.65、53.80±5.71、45.14±3.13、34.37±3.16;PBS组:26.3±2.56、57.62±6.14、43.56±2.30、34.38±2.63;BMSCs组:47.29±4.78、98.69±7.50、78.72±5.79、61.35±5.90。结果显示:在12h到1d的时间点,模型组、PBS组和BMSCs组Bcl-2阳性细胞个数随时间的延长均增加,1d后Bcl-2阳性数量开始较前明显减少(P0.05);同时间点,模型组Bcl-2阳性细胞数目明显高于空白组(P0.05);BMSCs组Bcl-2阳性细胞数目明显高于空白组、模型组和PBS组(P0.05);PBS组与模型组比较Bcl-2阳性细胞数目无明显差异(P0.05)。4.PCR检测mi R-21的表达水平:空白组:1±0.03;在12h、1d、3d、7d各时间点,模型组:1.35±0.08、2.19±0.04、1.80±0.10、1.37±0.10;PBS组:1.39±0.12、2.19±0.11、1.74±0.12、1.31±0.10;BMSCs组:1.64±0.10、3.49±0.17、2.69±0.07、1.96±0.18。结果显示:在12h到1d的时间点,模型组、PBS组和BMSCs组mi R-21表达随时间的延长均增加,1d后mi R-21表达开始较前明显减低(P0.05);同时间点,模型组mi R-21表达明显增高于空白组(P0.05);PBS组与模型组比较mi R-21的表达无明显差异(P0.05);BMSCs移植组mi R-21表达明显高于空白组、模型组和PBS组(P0.01)。结论1.移植骨髓间充质干细胞可改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能。2.骨髓间充质干细胞治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制可能与上调抗凋亡因子mi R-21和Bcl-2的表达有关。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 脑缺血再灌注 mi R-21 Bcl-2
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要英文缩略语索引10-12
• 第1章 绪论12-15
• 第2章 材料与方法15-24
• 2.1 实验动物分组15
• 2.2 仪器及试剂15-17
• 2.3 实验方法17-23
• 2.4 统计学处理23-24
• 第3章 结果24-31
• 3.1 大鼠MCAO模型的鉴定24
• 3.2 SD大鼠m NSS评定24-25
• 3.3 HE染色25-26
• 3.4 各组的脑组织中Bcl26-28
• 3.5 各组的脑组织中miR28-31
• 第4章 讨论31-36
• 4.1 关于MCAO模型31-32
• 4.2 Bcl-2的抗凋零作用32
• 4.3 MicroRNA - 21 的抗调亡作用32-33
• 4.4 BMSCs移植剂量、时间、部位的选择33
• 4.5 干细胞移植对大鼠缺血再灌注脑组织的作用机制33-34
• 4.6 提问与展望34-36
• 第5章 结论36-37
• 参考文献37-41
• 文献综述41-47
• 参考文献45-47
• 作者攻读学位期间的科研成果47-48
• 致谢48

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