G-CSF对神经干细胞缺氧损伤保护作用的研究

发布时间：2017-07-04 17:03

  本文关键词：G-CSF对神经干细胞缺氧损伤保护作用的研究

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【摘要】：目标:采用氯化钴建立神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)体外缺氧模型,观察体外缺氧环境下粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)对神经干细胞组蛋白去乙酰化酶2(Histone deacetylase 2,HDAC2)与低氧诱导因子-1α(Hypoxia-induci ble factor-1α,HIF-1α)表达的影响,探讨G-CSF对神经干细胞缺氧损伤的保护作用及其可能机制。方法:用鼠C17.2神经干细胞系作为研究对象,采用氯化钴(Co Cl2)模拟缺氧环境建立NSCs体外缺氧模型。设立正常对照组、缺氧组、G-CSF干预组,MTT法检测体外缺氧下不同浓度G-CSF对NSCs存活率的影响,显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,Western Blot法检测细胞HDAC2、HIF-1α的表达。结果:1.缺氧环境下神经干细胞的存活率:(1)50、100 umol/L Co Cl2组在12h出现细胞存活率上升,轻度增殖效应,其余时间点细胞存活率下降,差异具有显著性(P0.05);(2)不同浓度Co Cl2(50、100、200、400、800umol/L)在24h、48h、72h均呈浓度依赖性导致细胞存活率下降,差异具有显著性(P0.05);(3)200 umol/L Co Cl2呈时间依赖性导致细胞存活率下降;400、800umol/L Co Cl2作用各时间点细胞的存活率明显小于40%。2.G-CSF干预缺氧环境下神经干细胞的存活率:(1)不同浓度G-CSF(10、50、100ng/ml)在12h、24h、48h、72h细胞存活率均高于0ng/ml G-CSF+Co Cl2组,差异具有显著性(P0.05);(2)10ng/ml G-CSF组在24h细胞存活率较其他浓度组及时间点均高(P0.05),为88.7±1.2%。3.Western Blot结果:(1)200umol/L Co Cl2神经干细胞缺氧模型:HDAC2表达在12、24、48、72h均比0h降低,具有统计学意义(P0.05);HIF-1α表达在各时间点均比0h增高,24h的表达最高,具有统计学意义(P0.05)。(2)常氧环境下G-CSF处理神经干细胞24h后HDAC2、HIF-1α表达较正常组增加,具有统计学意义(P0.05);(3)缺氧环境下,缺氧组、G-CSF干预组HDAC2表达均低于正常组,缺氧组较G-CSF干预组低,差异具有显著性(P0.05);(2)缺氧组、G-CSF干预组HIF-1α高于正常组,缺氧组较G-CSF干预组高,差异具有显著性(P0.05)。结论:G-CSF能抑制神经干细胞的缺氧损伤,缺氧环境下G-CSF能上调神经干细胞中HDAC2、HIF-1α的表达,后者可能是前者发挥抗凋亡及神经保护作用的机制之一,且HDAC2与HIF-1α之间有某种关联。
【关键词】：神经干细胞 G-CSF HDAC2 缺氧 HIF-1α
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要英文缩略语索引8-10
• 第1章 绪论10-14
• 第2章 材料14-18
• 2.1 实验场地及细胞14
• 2.2 主要仪器及试剂14-18
• 第3章 实验方法18-24
• 3.1 神经干细胞的培养、传代及鉴定18
• 3.2 实验分组18-19
• 3.3 MTT比色法检测神经干细胞的存活率19
• 3.4 显微镜观察细胞凋亡情况19
• 3.5 Western Blot法检测HDAC2、HIF19-22
• 3.6 图像分析22
• 3.7 统计学处理22-24
• 第4章 实验结果24-28
• 第5章 讨论28-34
• 第6章 结论34-36
• 参考文献36-40
• 综述40-46
• 参考文献43-46
• 作者攻读学位期间的科研成果46-48
• 致谢48

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本文编号：518556