莫诺苷对缺血性脑卒中后神经干细胞增殖、分化的影响及机制研究

发布时间：2017-07-05 12:01

  本文关键词：莫诺苷对缺血性脑卒中后神经干细胞增殖、分化的影响及机制研究

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【摘要】：缺血性脑卒中有发病率高、致残率高和死亡率高等三高的特点,已成为我国居民的第二死因和成人第一位致残原因,对社会和家庭均造成了很大的负担。缺血性脑卒中能刺激内源性神经干细胞的增殖短时间内跃迁,发挥自体修复作用,为脑卒中的治疗提供了新的思路,但脑损伤所诱导的神经发生过程短暂,不足以修复脑缺血所造成的损伤,因此寻找内源性的药物或手段,进一步增强脑损伤诱导的自体干细胞增殖与分化的过程尤为重要。本论文研究目的是基于首都医科大学宣武医院王文教授在2007年所提出的脑卒中治疗“神经血管稳态重构”假说基础上,深入探讨莫诺苷对缺血性脑卒中后大脑神经干细胞增殖、分化的影响及其机制研究。选取体重在260g-280g之间的SD雄性大鼠,线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。缺血30min后再灌注,待大鼠清醒后用Zea Longa法对其进行神经功能行为学评分,评估造模是否成功。将造模成功者随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、莫诺苷小剂量组(morroniside+30mg/kg)、莫诺苷中剂量组(morroniside+90mg/kg)和莫诺苷大剂量组(morroniside+270mg/kg)。给药7天、14天、28天后分别用灌注取脑和新鲜取脑的方式取材。运用免疫荧光法以及免疫印迹法检测神经干细胞增殖与分化相关指标,并观察ephrin-B2/EphB4信号通路蛋白的表达变化。结果显示:(1)MCAO造模7、14天后,SVZ区B型神经干细胞、C型神经元前体细胞及A型神经母细胞数目均明显增多,14天时模型组B型神经干细胞、C型神经元前体细胞逐渐降低,A型神经母细胞逐渐升高,28天时B、C、A型细胞均恢复至假手术水平;缺血再灌注7、14天后,缺血侧皮层B型神经干细胞、C型神经元前体细胞数目及a型神经母细胞数目显著增多,14天时模型组b型神经干细胞、c型神经元前体细胞、a型神经母细胞逐渐升高,28天与假手术组相比无明显差别。表明局灶性脑缺血后,内源性神经干细胞增殖7天时达高峰,之后开始往缺血侧皮层迁移或分化为神经母细胞迁移至患侧皮层,而28天时也未发现有新生神经元,可能由于损伤的皮层不能提供神经细胞分化所需的微环境。给予莫诺苷后,7天、14天svz区和皮层b型神经干细胞、c型神经元前体细胞数目均进一步增加,28天时a型神经母细胞及新生神经元增多,莫诺苷可以促进脑缺血后神经干细胞增殖与分化且维持到28天时不降低,并可促进神经干细胞定向分化为神经元。(2)ephb4、ephrin-b2在缺血侧皮层b型神经干细胞、c型神经元前体细胞、a型神经母细胞及成熟神经元均有表达。ephrin-b2/ephb4信号通路可能参与莫诺苷促进神经干细胞增殖与分化的过程。(3)mcao造模7天后,免疫荧光显示,皮层梗死周边ephrin-b2、ephb4细胞数目显著增加,表明脑缺血后ephrin-b2/ephb4信号通路被激活,而给予莫诺苷能有效的调节该信号通路蛋白的表达,促进ephrin-b2及其受体ephb4的合成,并对下游关键蛋白abl的激活有促进作用。同时脑缺血刺激引起ephrin-b2/ephb4信号通路下游周期蛋白cyclind1、cdk4、cdk6,及ephb4+/nestin+、ephb4+/brdu+双阳性细胞表达升高,表明脑缺血后的神经干细胞增殖与ephrin-b2/ephb4信号通路有关,莫诺苷可进一步调节ephrin-b2/ephb4信号通路促进神经干细胞细胞增殖。(4)mcao造模7天后,ephb4+/sox2+、ephb4+/dcx+双阳性细胞数目显著增加,莫诺苷可以促进ephb4+sox2+、ephb4+dcx+双阳性细胞进一步增加,到28天时,莫诺苷组ephb4+/neun+阳性细胞数目显著增加。说明莫诺苷可通过ephrin-b2/ephb4信号通路促进神经干细胞分化及定向分化为神经元。综上得出结论:莫诺苷可以促进缺血性脑卒中后svz区神经干细胞增殖、分化并迁移至缺血侧皮层,促进神经干细胞分化为神经元,对神经功能的恢复起至关重要的作用,并且ephrin-b2/ephb4信号通路参与莫诺苷促进神经干细胞增殖与分化的过程,该通路很可能是莫诺苷促神经血管稳态重构的具体靶点,对脑卒中等疾病的临床治疗具有重要的指导意义。
【关键词】：莫诺苷 缺血性脑卒中 神经干细胞 增殖与分化 ephrin-B2/EphB4信号通路
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-23
• 结果23-28
• 附图28-43
• 附表43-50
• 讨论50-53
• 参考文献53-58
• 结论58-59
• 综述 大脑神经发生相关信号通路的研究进展59-72
• 参考文献68-72
• 致谢72-73
• 个人简历73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李亚健;李焰生;;室管膜下区神经发生的研究进展[J];神经病学与神经康复学杂志;2009年01期

2 刘罡;吴毅;;局灶性脑缺血对内源性神经干细胞激活及迁移的影响[J];中国康复医学杂志;2009年02期

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本文编号：521839