microRNA-7在大鼠MCAO模型中与PARP调控关系的研究

发布时间：2017-07-07 05:07

  本文关键词：microRNA-7在大鼠MCAO模型中与PARP调控关系的研究

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【摘要】：[目的]本课题采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,测定脑缺血半暗带中miR-7和PARP的表达；并采用脑室内立体定向注射miR-7 agomir或miR-7antagomir过表达miR-7或抑制miR-7表达,通过测定脑缺血半暗带中miR-7、PARP的表达及脑梗死体积、细胞凋亡、神经功能评分。探讨在大鼠MCAO模型中miR-7与PARP的调控关系、miR-7在脑缺血中对脑损伤的影响及其分子机制。[方法]将60只健康成年雄性大鼠随机分为4组,每组15只：假手术组、单纯脑梗组、miR-7激动组、miR-7抑制组。采用线栓法建立SD大鼠MCAO(大脑中动脉栓塞)模型。采用Zea Longa评分判断模型是否进入实验。采用脑室内立体定向注射的方法将miR-7 agomir或miR-7 antagomir注入大鼠侧脑室内调控大鼠脑内miR-7的表达。MCAO模型制备完成24小时后采用mNSS评分法对大鼠进行神经功能评分。通过氯化三苯基四氮唑染色法来鉴别梗死与非梗死脑组织：白色为梗死区,红色为非梗死区。采用免疫酶法检测各组大鼠脑组织中PARP的表达。采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织中细胞凋亡情况。采用RT-PCR定量检测各组大鼠脑缺血半暗带中miR-7的表达。采用Western Blot检测各组大鼠脑缺血半暗带中PARP的表达。[结果]1.在SD大鼠MCAO模型中miR-7表达降低：和假手术组相比,各组脑缺血大鼠脑缺血半暗带中miR-7的表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)；2.通过脑室内立体定向注射miR-7 agomir或miR-7 antagomir可成功调控miR-7的表达：采用Real-time PCR检测脑缺血半暗带中miR-7的表达,与单纯脑梗组相比,miR-7激动组大鼠脑缺血半暗带中miR-7的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而miR-7抑制组大鼠脑缺血半暗带中miR-7的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。3.miR-7抑制PARP-表达：与单纯脑梗组相比,miR-7激动组miR-7表达增高,同时PARP-1表达减少,差异均有统计学意义(P0.05); miR-7抑制组miR-7表达显著减少,同时PARP的表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。表明miR-7可以抑制PARP表达,PARP的表达受miR-7的调控,PARP可能是miR-7的靶基因。4.在大鼠MCAO模型中,miR-7的表达变化对脑损伤产生的影响：与单纯脑梗组相比,miR-7激动组脑梗死范围减小、细胞凋亡减少、神经功能缺失减少,差异均有统计学意义(P0.05)；相反,miR-7抑制组梗死范围增大、细胞凋亡增多、神经功能缺失增加,差异均有统计学意义(P0.05)。表明miR-7在脑缺血后脑损害中发挥重要作用,过表达miR-7可以减轻脑缺血诱导的脑损伤。[结论]1.大鼠脑缺血后24小时脑缺血半暗带中miR-7的表达降低。2.通过脑室内立体定向注射miR-7 agomir或miR-7 antagomir可成功调控miR-7的表达。3.在大鼠脑组织中,PARP的表达受miR-7的调控, PARP可能是miR-7的靶基因。4.过表达miR-7可以减小脑梗死范围、减少细胞凋亡、减轻神经功能缺损症状,减轻脑缺血性损伤。5.在大鼠脑缺血病理过程中,miR-7发挥脑保护作用,其减轻脑缺血性损伤的机制可能是抑制PARP表达。
【关键词】：脑缺血 miRNA PARP 细胞凋亡
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3;R-332
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-32
• 结果32-43
• 讨论43-51
• 结论51-52
• 参考文献52-56
• 综述56-64
• 参考文献60-64
• 攻读学位期间获得的学术成果64-65
• 致谢65

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本文编号：528912