氟康唑在大鼠血—脑屏障和血—脑脊液屏障中的转运机理研究

发布时间：2017-07-08 14:06

  本文关键词：氟康唑在大鼠血—脑屏障和血—脑脊液屏障中的转运机理研究

  更多相关文章： 血-脑屏障 血-脑脊液屏障 P糖蛋白 氟康唑 微透析 中枢神经系统 脑细胞外液 脑脊液

【摘要】：背景：血脑之间存在三大屏障：血-脑屏障、血-脑脊液屏障和脑脊液-脑屏障以维持脑内环境稳态,通常认为血-脑屏障为其中最主要的屏障。血-脑屏障微观结构主要包括：①血管内皮细胞和其间的紧密连接；②内皮细胞外的基底膜及由非特异性胆碱酯酶和核苷酸酶等构成的酶屏障；③基底膜下星形胶质细胞的终足构成的胶质膜屏障[1,2]。根据血-脑屏障分子结构分析,药物最难通过的应该是血-脑屏障,且透过血-脑屏障最重要的决定因素应该是药物分子的大小和脂溶性。但事实不尽如此,如长春新碱、表鬼臼毒素虽然脂溶性很高,但血-脑屏障通过能力很差。1980年Cordon-Cardo等发现这与一种转运蛋白P-GP(P-glycoprotein)有关,并证明其在脑毛细血管内皮细胞中高度表达,能够识别不同作用机制的药物,并将其泵出血-脑屏障以外,而加强了血-脑屏障和血-脑脊液屏障的功能。近期研究表明：该类蛋白在颅内不同部位其功能亦不同,如P-GP蛋白在毛细血管内皮细胞上为外排蛋白(efflux transporter),在脉络丛内皮细胞上则为内流蛋白(influx transporter)[5-9],该研究结果可能与临床中发现的氟康唑在脑脊液中浓度高低与其药效不成正相关的机理有关,但仍有待证实。目的：比较在有无P-GP拮抗剂维拉帕米时大鼠血浆(P)、 脑脊液(CSF)、脑细胞外液(bECF)中氟康唑浓度的差别,了解氟康唑进入血液和透过血-脑脊液屏障、血-脑屏障后的分布代谢情况,研究生理状态下P-GP在血-脑脊液屏障和血-脑屏障中的转运功能,并通过体内实验验证氟康唑是否为P-GP的作用底物。方法：研究单次尾静脉给予氟康唑(40mg/kg)后,使用微透析技术联合高效液相色谱紫外检测方法观察大鼠在生理状态下和局部给予P-GP拮抗剂维拉帕米情况下的血浆、脑脊液、脑细胞外液游离氟康唑药物浓度,并计算药物浓度-时间曲线下面积(AUC)和氟康唑的脑脊液、脑细胞外液透过率,统计学分析其透过率差别及与P-GP功能的相关性。结果：成功建立了脑双位点同步微透析S.D.大鼠模型。尾静脉给药后,氟康唑组：氟康唑在血浆、脑脊液、脑细胞外液的分布均存在显著性差异(P0.05)：仅在180min之内脑细胞外液浓度(3.13～4.15μg/ml)达到新型隐球菌的最低抑菌浓度(3.12-6.25μg/m1)的低限；5h内的血-脑脊液屏障透过率(AUCCSF-0～5h/AUCplasma-0-5h)明显高于血-脑屏障透过率(AUCbECF-0～5h/AUCplasma-0-5h),两者间存在显著性差异(P0.05)。氟康唑+维拉帕米组：氟康唑在血浆、脑脊液、脑细胞外液的分布均存在显著性差异(P0.05)；5h内的血-脑脊液屏障透过率明显高于血-脑屏障透过率,两者间存在显著性差异(P0.05)；氟康唑+维拉帕米组与氟康唑组相比：血浆药物浓度无显著性变化(P0.05),脑细胞外液药物浓度显著性升高(P0.05),且5h内均达到了新型隐球菌的最低抑菌浓度,延长了有效抑菌时间,而脑脊液药物浓度稍有下降但未见显著性差异(P0.05)；血-脑屏障透过率(AUCbECF-0～5h/AUCplasma-0-5h也显著性升高(P0.05)。结论：脑双位点同步微透析法成功用于获取脑脊液、脑细胞外液透析液样品；氟康唑在脑脊液、脑细胞外液的分布代谢存在显著性差异；加用P-GP抑制剂维拉帕米后氟康唑在脑脊液分布减少,而在脑细胞外液分布明显增多,由此可以推断：氟康唑是P-GP的作用底物；P-GP在血-脑屏障中发挥重要的外排转运作用,在血-脑脊液屏障中发挥相对较弱的内转运作用；P-GP抑制剂为临床中增加药物的血-脑屏障透过率提供了一个新的研究视角。
【关键词】：血-脑屏障 血-脑脊液屏障 P糖蛋白 氟康唑 微透析 中枢神经系统 脑细胞外液 脑脊液
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩略词10-11
• 前言11-13
• 第一章 侧脑室、纹状体双位点同步微透析大鼠模型的建立13-18
• 材料与方法13-15
• 结果15
• 讨论15-17
• 小结17-18
• 第二章 氟康唑在大鼠的血-脑屏障和血-脑脊液屏障的转运机理研究18-35
• 材料与方法18-23
• 结果23-31
• 讨论31-34
• 小结34-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-39
• 文献综述39-49
• 参考文献45-49
• 附图49-50
• 致谢50

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本文编号：534847