脑缺血再灌注大鼠PDCD-5的表达及依达拉奉干预后对其的影响

发布时间：2017-07-17 00:18

  本文关键词：脑缺血再灌注大鼠PDCD-5的表达及依达拉奉干预后对其的影响

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【摘要】：目的:本实验采用SD(Sprague Dawley)大鼠脑缺血再灌注模型,并从形态学水平、分子水平及药物干预等方面进行研究,检测脑缺血再灌注大鼠海马组织中PDCD-5和Caspase-3的表达变化,并观察依达拉奉对缺血再灌注大鼠的海马组织中细胞凋亡的影响及PDCD-5和Caspase-3的表达的影响,探讨依达拉奉是否能通过抑制PDCD-5的表达而抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。方法:选择10-12周龄,体重约250g-300g的清洁级雄性健康SD大鼠80只,随机分为:空白对照组(n=8),假手术组(n=24),脑缺血再灌注(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)组(n=24)及药物干预组(n=24)四个组。又将脑缺血再灌注组和依达拉奉药物干预组随机分为4个亚组,分别是:6h组、1d组、3d组、7d组,每个亚组6只大鼠。选择Longa法结合后人的改良方案,建立SD大鼠大脑中动脉缺血2小时后再灌注模型,造模后选择动物行为学评分法来评价SD大鼠的神经功能缺损情况,运用HE染色观察海马病理形态,运用TTC染色观察脑梗死的面积百分比,运用TUNEL法检测不同时期细胞凋亡的变化,采用Western blot方法检测不同时期海马组织中PDCD-5和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:1.神经功能缺损评分:空白对照组和假手术组的神经功能缺损评分均为0分,脑缺血再灌注组(I/R组)和药物干预组0-4分的神经功能缺损评分均有,0分及4分的大鼠已被剔除,从同批次的大鼠中随机补充,药物干预组的的神经功能缺损评分(实验结束时)与脑缺血再灌注组比较明显减少,其差异有统计学意义(P0.05)。2.HE染色结果:在空白对照组和假手术组,可见SD大鼠海马CA1区神经元结构完整,边界清晰,未见间质水肿,没有明显梗塞灶。而在脑缺血再灌注组,可见海马CA1区神经元细胞产生坏死,有明显的数量减少,药物干预组与脑缺血再灌注组比较,可见相对较多的神经元,结构稍清晰,脑组织损伤程度明显减轻。3.TTC染色:空白对照组与假手术组未见梗死灶,脑缺血再灌注组与药物干预组均可见明显的梗死灶,而且药物干预组脑梗死的面积百分比与脑缺血再灌注组比较明显减少,其差异具有统计学意义(P0.05)。4.TUNEL法检测细胞凋亡:空白对照组及假手术组有少量的细胞凋亡,在脑缺血再灌注组中,凋亡细胞阳性数在6h时开始升高,3d时达到峰值,之后逐渐下降,但所有亚组仍比假手术组和空白对照组高,其差异有统计学意(P0.05)。在药物干预组中,凋亡细胞阳性数的变化趋势与I/R组一致,同样在6h时开始升高,3d时达到峰值,之后逐渐下降,所有亚组与脑缺血再灌注组对应的亚组比较凋亡细胞阳性数均减少,其差异具有统计学意义(P0.05)。5.Western blot检测结果:在空白对照组和假手术组中大鼠的海马CA1区,可检测到PDCD-5和Caspase-3蛋白的表达,在脑缺血再灌注组中PDCD-5蛋白及Caspase-3蛋白在6h时开始升高,3d时达到峰值,之后逐渐下降,但所有亚组仍比假手术组和空白对照组高,其差异具有统计学意(P0.05)。在药物干预组中PDCD-5及Caspase-3的表达趋势与I/R组相差无几,同样在6h时开始升高,3d时达到峰值,之后逐渐下降,所有亚组与脑缺血再灌注组对应的亚组比较PDCD-5及Caspase-3的表达明显减少,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.SD大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织中PDCD-5表达升高,其与Caspase-3呈正相关。2.依达拉奉可以抑制SD大鼠脑缺血再灌注后海马组织中PDCD-5的表达,并可以抑制细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤起脑保护作用。
【关键词】：脑缺血再灌注 PDCD-5 细胞凋亡 依达拉奉
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-13
• 第一章 引言13-16
• 第二章 材料和方法16-23
• 2.1 实验动物16
• 2.2 主要药品和试剂16-17
• 2.3 主要实验仪器17
• 2.4 实验动物分组及模型制备17-19
• 2.5 灌注和取材及组织石蜡切片制备19
• 2.6 HE染色19-20
• 2.7 TTC染色20
• 2.8 TUNEL显色20
• 2.9 Western blot法检测大鼠海马区PDCD-5 和caspase-3 的表达20-22
• 2.9.1 收集蛋白样品20-21
• 2.9.2 电泳21
• 2.9.3 转膜21
• 2.9.4 封闭21-22
• 2.9.5 一抗孵育22
• 2.9.6 二抗孵育22
• 2.9.7 蛋白检测22
• 2.10 统计学处理22-23
• 第三章 结果23-35
• 3.1 模型制备结果及实验动物的一般情况23-24
• 3.2 TTC染色24
• 3.3 HE染色24-25
• 3.4 TUNEL检测细胞凋亡25-26
• 3.5 West-Blot检测结果26-29
• 3.6 附图29-35
• 第四章 讨论35-40
• 第五章 结论40-41
• 参考文献41-48
• 综述48-61
• 参考文献54-61
• 主要缩写词表61-62
• 在读期间发表的主要学术论文及获奖情况62-63
• 致谢63

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本文编号：551195