PTZ诱导癫痫急性发作对大鼠大脑神经元F-actin、Calponin3和ROCK2表达水平变化的影响

发布时间：2017-07-29 06:07

  本文关键词：PTZ诱导癫痫急性发作对大鼠大脑神经元F-actin、Calponin3和ROCK2表达水平变化的影响

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【摘要】：目的： 探讨戊四氮（PTZ）诱发的大鼠癫痫急性发作对大脑F-actin、Calponin3、ROCK2表达及其磷酸化水平的影响，阐明癫痫急性发作期阻断F-actin异常解聚、触发F-actin重构的可能机制。 方法： 实验采用3周龄Wistar幼鼠，设对照组和癫痫组。癫痫组动物经腹腔注射PTZ60mg/kg建立癫痫急性发作模型，观察动物行为改变，并记录脑电图判断模式是否成功。造模成功的动物根据发作后时间随机分为4组：1d组、2d组、3d组和7d组，分别在癫痫急性发作后的相应时间点处死动物取材。利用Alexa-488标记的phalloidin进行荧光染色观察动物大脑神经元内细胞骨架F-actin；利用免疫荧光染色观察大脑神经元中Calponin3和ROCK2分布；利用Western blot检测海马中Calponin3、ROCK2及磷酸化ROCK2的表达水平。 结果： 1.腹腔注射PTZ60mg/kg后，幼鼠行为变化达到Racine分级4-5级，EEG表现出多种形式的癫痫样波。 2. phalloidin荧光标记显示：与对照组相比，癫痫急性发作1d后，大鼠树突棘密集的海马CA1区、CA3区中F-actin荧光强度降低（P0.05），点状聚集结构消失。 3.免疫荧光染色结果显示：对照组Calponin3在神经元胞质弥漫内分布，而癫痫急性发作7d后神经元内Calponin3则聚集在细胞皮质（即细胞膜周边的薄层细胞质）；对照组ROCK2仅在少量神经元突起内分布，而癫痫急性发作7d后大量神经元内胞体和突起内均可见ROCK2分布。 4. Western blot结果显示：与对照组相比，癫痫组各时间点的Calponin3表达水平显著降低（P0.05），但是随着时间延长一周内逐渐升高并趋向正常水平。与对照组相比，癫痫组ROCK2的表达水平从癫痫急性发作后3d开始显著增加并持续至造模后7d（P0.05）；磷酸化ROCK2水平则从癫痫急性发作后1d就开始显著增加并持续到7d（P0.05），随着时间延长逐渐降低。 结论： 利用腹腔注射PTZ60mg/kg成功建立大鼠癫痫急性发作模型。 PTZ诱导大鼠癫痫急性发作导致F-actin异常解聚，同时激活RhoA/ROCK2信号途径，上调ROCK2和Calponin3蛋白表达水平。依赖RhoA/ROCK2信号途径的Calponin3磷酸化可能是防止F-actin进一步异常解聚并触发F-actin重构的可能机制。
【关键词】：癫痫 戊四氮 丝状肌动蛋白 Calponin3 ROCK2
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• abstract7-12
• 中英文缩略词对照表12-13
• 第1章 绪论13-14
• 第2章 综述14-23
• 2.1 癫痫脑组织的病理学改变14-16
• 2.1.1 癫痫脑组织的基本病理学改变14
• 2.1.2 不同类型癫痫的组织病理学特点14-16
• 2.2 F-ACTIN 与癫痫树突棘缺失和重建的关系16-18
• 2.2.1 F-actin 是重要的细胞骨架成分16
• 2.2.2 F-actin 异常与癫痫病程中树突棘缺失和重建密切相关16-18
• 2.3 F-ACTIN 结合蛋白 CALPONIN 3 与癫痫密切相关18-19
• 2.4 CALPONIN 3 的磷酸化依赖 RHOA/ROCK 2 信号途径19-23
• 第3章 建立 PTZ 诱导的幼鼠癫痫急性发作模型23-27
• 3.1 材料和方法23-24
• 3.1.1 材料23
• 3.1.2 方法23-24
• 3.2 结果24-25
• 3.2.1 行为学改变24
• 3.2.2 脑电图变化24-25
• 3.3 讨论25-27
• 第4章 癫痫急性发作模型大鼠大脑神经元 F-ACTIN、CALPONIN3 和ROCK2 表达水平变化27-41
• 4.1 材料27-28
• 4.1.1 动物27
• 4.1.2 试剂27
• 4.1.3 仪器27-28
• 4.2 方法28-32
• 4.2.1 分组及给药28
• 4.2.2 取材28
• 4.2.3 荧光标记 F-actin28
• 4.2.4 免疫荧光检测28-29
• 4.2.5 Western Blot 检测29-32
• 4.2.6 统计学处理32
• 4.3 结果32-38
• 4.3.1 大脑皮层和海马神经元中细胞骨架成分 F-actin 异常解聚32-34
• 4.3.2 大脑皮层和海马神经元内 Calponin3 重新分布34-35
• 4.3.3 大脑皮层和海马神经元中 ROCK2 增多35-36
• 4.3.4 海马Calponin3、ROCK2 和磷酸化ROCK2 蛋白的表达水平改变36-38
• 4.4 讨论38-41
• 第5章 结论41-42
• 参考文献42-53
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果53-55
• 致谢55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 张军;黄晓元;王凌峰;;调宁蛋白的研究进展与展望[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年02期

2 肖保国;;Rho激酶抑制剂的研究现状及其在神经系统疾病中的应用前景[J];重庆医科大学学报;2008年S1期

3 刘学伍,于美娟,迟兆富,吴伟;癫痫发作神经组织病理学研究进展[J];山东医药;2002年14期

4 刘学伍,迟兆富,潘姝,吴伟;儿童难治性癫痫引起智力低下的机制及预后干预[J];脑与神经疾病杂志;2001年06期

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本文编号：587723