促肾上腺皮质激素释放因子通过对GSK3β的磷酸化促进U87MG细胞的凋亡

发布时间：2017-07-29 19:19

  本文关键词：促肾上腺皮质激素释放因子通过对GSK3β的磷酸化促进U87MG细胞的凋亡

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【摘要】：背景:胶质瘤是中枢神经系统中最常见的肿瘤,呈浸润性生长,易侵犯重要的神经结构,预后差,复发率及死亡率高。虽然外科手术和放化疗治疗效果都有了极大的提高,但是还远未达到理想的效果。能否通过生物治疗(靶向治疗)延长患者生存期,这给我们提供了一个全新的思路。研究表明,提高细胞内cAMP水平并激活cAMP依赖的信号转倒途径能够促进中枢及外周各种神经组织的存活。在CRF作用于小脑颗粒细胞的研究中发现CRF-CRFR-cAMP-PKA激活,最终导致GSK-3β的磷酸化在神经保护作用中发挥重要作用[1]。GSK3β的生物学功能较复杂,在肿瘤细胞侵袭与转移及凋亡、癌细胞基因转录、加速细胞周期过程中起到调控作用。GSK3β在不同遗传背景的细胞中发挥不同的作用,所以必须明确特定细胞中GSK3β激活与失活所发挥的作用才能进一步加以利用。前期实验研究发现CRF能促进胶质瘤U87MG凋亡,且凋亡相关蛋白capase-3的表达与细胞凋亡趋势一致,进一步研究发现CRF作用于U87细胞后细胞内cAMP及PKA水平明显升高。CRF作用于两种细胞后上游信号分子的表达趋势一致,但是结果却完全相反,所以有必要进一步研究CRF作用下U87MG内GSK3β的活性状态及对细胞凋亡所起的作用。目的:研究CRF作用于人脑胶质瘤U87MG细胞后pGSK3β在细胞浆和细胞核的表达情况,探讨pGSK3β在CRF促进U87MG细胞凋亡中所起作用。方法:1免疫荧光显微镜检测正常U87细胞和CRF作用后的细胞内pGSK3β是否有表达。2培养U87细胞,用不同浓度CRF(10~(-7),10~(-8),10~(-9) mol/L)进行干预,干预时间分为12h,24h,36h,每个浓度和时间点都设置相应的对照组。然后应用胞浆/胞核蛋白提取试剂盒分开提取胞浆和胞核蛋白,用western blot检测细胞浆及细胞核pGSK3β的表达情况。结果:1免疫荧光显微镜显示:对照组和实验组都有pGSK-3β的表达。2 Western blot检测细胞浆与细胞核pGSK-3β的结果显示:CRF 10~(-7)mol/L组:12h,24h实验组细胞浆和细胞核pGSK-3β的表达量与对照组无明显差别(胞浆Z_(12h)=-1.091,P=0.1375,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.655,P=0.2565)。36h实验组细胞浆和细胞核pGSK-3β的表达量明显高于对照组(胞浆Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-8) mol/L组:12h,24h实验组细胞浆和细胞核pGSK-3β的表达量与对照组无明显差别(胞浆Z_(12h)=-1.107,P=0.134,Z_(24h)=-1.528,P=0.0635,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375)。36h实验组细胞浆和细胞核pGSK-3β的表达量明显高于对照组(胞浆Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-9) mol/L组:12h,24h,36h实验组细胞浆和细胞核pGSK-3β的表达量与对照组无明显差别(胞浆Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,Z_(36h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.218,P=0.2135,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375,Z_(36h)=-1.091,P=0.1375)。3 36h实验组胞浆和胞核pGSK-3β/36h对照组胞浆和胞核pGSK-3β的统计结果显示:CRF 10~(-7) mol/L,CRF 10~(-8) mol/L,CRF 10~(-9) mol/L三组之间存在明显差别(胞浆Chi-square_(实验组/对照组)=7.200,P=0.027,胞核Chi-square_(实验组/对照组)=7.200,P=0.027)。结论:1免疫荧光显微镜显示:U87MG细胞内存在pGSK-3β的表达。2 Western blot检测细胞浆与细胞核pGSK-3β的结果显示:CRF能够促进GSK3β的磷酸化,且呈浓度依赖性,浓度越高作用越强。
【关键词】：CRF U87MG细胞株 GSK-3β 免疫荧光 凋亡
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-19
• 结果19-20
• 附图20-27
• 讨论27-33
• 结论33-34
• 参考文献34-38
• 综述 促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、糖原合成酶激酶-3（GSK3）、磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）间相互关系的研究进展38-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

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本文编号：590698