敲除L-periaxin基因的大鼠RSC96细胞系的建立
本文关键词：敲除L-periaxin基因的大鼠RSC96细胞系的建立
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【摘要】：轴周蛋白(Periaxin)是外周神经系统非致密性髓鞘中特异表达的蛋白,编码Periaxin的基因经由选择性剪接产生两种蛋白异构体L-periaxin和S-periaxin,对髓鞘形成的初始化有重要作用。至今在Periaxin基因上已发现有18种不同的位点突变导致外周脱髓鞘神经疾病腓骨肌萎缩症4F亚型(CMT4F)的发生。利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向基因敲除技术对大鼠RSC96细胞的periaxin基因进行敲除,根据TALENs设计原则,确定L-periaxin基因的敲除靶点在其编码NLS结构域部分,设计相应的TALEN左臂与右臂的识别序列,构建含上述识别序列的L-periaxin基因敲除载体TALEN-L和TALEN-R,并将其转入RSC96细胞,经嘌呤霉素药物筛选,获得L-periaxin基因敲除细胞株,经测序确认大鼠RSC96细胞中的基因组中L-periaxin基因区段已被敲除,成功构建了L-periaxin基因敲除细胞模型。计算L-periaxin基因敲除载体的突变率为21.6%。Western blotting实验证明,在RSC96细胞中只能检测到S-periaxin蛋白的表达。通过流式细胞术及MTT实验检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度,发现敲除L-periaxin基因的细胞生长速度缓慢,G1期细胞增多,S期细胞减少。
【作者单位】： 山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室;
【关键词】： periaxin 基因敲除 RSC细胞 TALEN技术
【基金】：国家自然科学基金(No.31170748) 山西省研究生教育创新项目(No.2016BY025)资助~~
【分类号】：R741
【正文快照】： Received:April 25,2016;Accepted:September 6,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.31170748),the Graduate Education and Innovation Program ofShanxi Province(No.2016BY025).Corresponding author:Yawei Shi.Tel:+86-13803451349;E-mail
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