Syndecan-1沉默抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭及其潜在机制

发布时间：2017-08-03 14:26

  本文关键词：Syndecan-1沉默抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭及其潜在机制

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【摘要】：目的分析多配体蛋白多糖-1(Syndecan-1,SDC1)的表达水平与胶质瘤的病理级别及胶质瘤患者生存率的关系;检测SDC1在不同胶质瘤细胞株中的表达水平,探讨SDC1沉默对A172和U87胶质母细胞增殖和侵袭的影响及其机制;皮下成瘤实验验证SDC1的沉默对胶质瘤增殖和侵袭的影响。方法1.利用The Cancer Genome Atlas(TCGA)和the National Center for Biotechnology Information Gene Expression Omnibus(NCBI-GEO)数据库,通过R数据包分析SDC1的表达水平与胶质瘤的病理级别及胶质瘤患者生存率的关系;2.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot分析SDC1在不同胶质瘤细胞株中的表达水平;构建SDC1稳定沉默的A172和U87细胞株,转染SDC1-sh RNA序列的细胞株为干扰组(sh SDC1),转染scramble序列者为空白对照组(Scramble),未转染者为阴性对照组(Control);3.采用MTT法、台盼蓝拒然法、流式细胞术和Transwell小室实验分析SDC1的沉默对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,qRT-PCR和Western Blot检测SDC1及相关蛋白的表达;4.Western Blot探讨SDC1沉默抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭的潜在机制;5.皮下成瘤实验验证SDC1沉默对胶质瘤细胞体内成瘤的影响。结果1、TCGA和NCBI-GEO的数据分析显示:胶质瘤中SDC1表达随着胶质瘤病理级别的增加而表达增强(P0.0001);SDC1的表达超过平均表达水平2/3的胶质瘤患者生存率明显低于其表达低于平均水平1/3的胶质瘤患者(P=0);2、qRT-PCR和Western blot显示SDC1高表达于细胞株U87和A172细胞中,低表达于细胞株U251和SHG-44(P0.05);成功构建稳定沉默SDC1的A172和U87胶质母细胞细胞株,qRT-PCR和Western blot显示SDC1的表达在干扰组中显著下降(P0.01);3、MTT实验、生长曲线和平板克隆实验显示SDC1的沉默抑制A172和U87细胞的增殖(P0.05);流式细胞检测显示,A172和U87干扰组中细胞增殖率(30.84%±3.41%和35.64%±5.24%)较阴性组(47.76%±0.39%和47.20%±0.92%)和空白组(50.02%±3.39%和45.69%±1.44%)相比明显下降(P0.01);Transwell小室实验显示,A172和U87细胞干扰组中细胞迁移力(58.40±5.24vs255.8±16.09,226.5±22.84和138.1±3.21vs 319.0±10.91,307.8±8.83,P0.01)和侵袭力(61.67±16.26 vs 233.7±17.24,244.3±28.15和840.7±48.64 vs1400±53.84,1416±98.33,P0.01)也明显降低;qRT-PCR和Western blot显示干扰组PCNA和MMP-9表达明显降低(P0.01);4、与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组中c-src Tyr 416和FAK Tyr 397磷酸化程度在A172干扰组中下降1.61倍和2.21倍,U87中下降1.78倍和1.5倍(P0.05);c-src/FAK复合物下游信号Erk,p-38mapk和Akt的磷酸化程度,在A172干扰组中下降2.16倍,3.55倍和1.48倍,在U87细胞中为2.07倍,2.80倍和1.71倍(P0.05);5、裸鼠成瘤实验显示,干扰组和对照组的肿瘤体积分别为830±500mm3和4800±1530 mm3(P0.05);肿瘤在干扰组和对照组中的平均质量分别为0.89±0.34 g vs 2.30±1.05 g(P0.05);两组裸鼠的体重无明显差异;免疫组化实验显示干扰组中SDC1表达强度降低,血管密度降低。结论1、胶质瘤中SDC1表达增强与肿瘤等级及不良预后密切相关;体外实验显示SDC1的沉默抑制胶质瘤的增殖,侵袭和迁移;体内实验显示SDC1的沉默抑制胶质瘤的皮下成瘤的增殖和恶性进展;2、SDC1的沉默可能通过下调c-src/FAK复合物的活性抑制A172和U87胶质瘤细胞的integrinαⅤβ3/αⅤβ5信号通路,有望成为胶质瘤生物治疗的新靶点。
【关键词】：胶质瘤 多配体蛋白多糖-1 增殖和侵袭 c-src/FAK
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-23
• 2 结果23-38
• 3 讨论38-41
• 4 结论41-42
• 参考文献42-47
• 文献综述47-59
• 参考文献52-59
• 致谢59-60
• 发表论文和参加科研情况说明60

【参考文献】

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1 姜华,周幽心,邵忠,傅军,黄煜伦,叶明;Syndecan-1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[J];苏州大学学报(医学版);2005年01期

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本文编号：614833