聚乙烯亚胺介导Bmk CT基因对C6胶质瘤细胞体内外作用研究
发布时间：2017-08-04 13:19
本文关键词：聚乙烯亚胺介导Bmk CT基因对C6胶质瘤细胞体内外作用研究
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【摘要】：目的东亚钳蝎氯离子通道毒素(Buthus martensii Karsch Chlorotoxin-like Toxin,Bmk CT)是一个神经毒素蛋白,可以特异性的与胶质瘤细胞结合而不与正常细胞结合。基质金属蛋白酶2和氯离子通道是其和胶质瘤细胞的两个结合位点。实验证明通过腹腔注射Bmk CT蛋白,能够显著抑制大鼠皮下胶质瘤的生长和转移。为了降低免疫原性,防止蛋白降解以及降低成本,前期实验优化了Bmk CT基因密码子序列并整合到腺病毒载体,获得重组病毒Ad-Bmk CT,将其注射荷瘤鼠瘤内,能抑制肿瘤生长和转移。而由于病毒载体体内注射的安全性问题,本课题组构建了pEGFP-N1-Bmk CT重组质粒,并期望通过非病毒载体体内转染的方式达到治疗效果。方法采用阳离子聚合物(polyethyleneimine,PEI)转染pEGFP-N1-Bmk CT重组质粒和pEGFP-N1空载体至C6胶质瘤细胞,进行MTS实验,观察36 h、48 h、72h时生长抑制率和细胞转染率。Western blot检测转染后48 h时PCNA、cyclinD1、c-myc、VEGF、MMP-9、AQP-1、p-ERK、p-AKT、p-NF-κBp65蛋白表达水平。构建原位C6胶质瘤大鼠模型,核磁检查成瘤率,同时将造模成功动物随机分为3组,对照组,pEGFP-N1-Bmk CT基因治疗组,pEGFP-N1空载体组。在造模后第13天,分别用生理盐水、PEI/pEGFP-N1-Bmk CT、PEI/pEGFP-N1瘤内注射。48 h后,通过荧光显微镜观察和免疫组化检测基因转染区域GFP蛋白表达情况;免疫荧光检测p-ERK、PCNA、cyclinD1、VEGF蛋白表达水平。结果PEI/pEGFP-N1-Bmk CT对C6细胞有较好的转染率;MTT实验中,36 h、48 h、72 h基因治疗组细胞生存活力较空载体组均降低,具有显著性差异(P㩳0.05);western blot结果显示PCNA、cyclinD1、c-myc、vegf、AQP1、p-ERK、p-AKT、p-NF-κBp65表达均减少;组织的免疫组化显示GFP蛋白在胶质瘤细胞质中有表达,荧光显微镜下观察冰冻切片,基因治疗组与空载体组相比,在绿色荧光蛋白相当的地方,p-ERK、PCNA、cyclin D1、VEGF蛋白表达水平下降。结论PEI转染pEGFP-N1-Bmk CT重组质粒在体内外均可获得相当的转染率,能够抑制肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤水肿相关蛋白的表达。这可能与抑制ERK、AKT、NF-κB通路过度活化有关。
【关键词】：Bmk CT PEI 胶质瘤 增殖 水肿 通路
【学位授予单位】：山西中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：
- 中文摘要3-4
- 英文摘要4-6
- 主要符号表6-9
- 第一部分 聚乙烯亚胺介导Bmk CT基因对C6胶质瘤细胞体外作用研究9-25
- 前言9-11
- 材料11-12
- 方法12-14
- 结果14-18
- 讨论18-21
- 结论21-22
- 参考文献22-25
- 第二部分 聚乙烯亚胺介导Bmk CT基因对C6胶质瘤细胞体内作用研究25-37
- 前言25-27
- 材料27
- 方法27-30
- 结果30-33
- 讨论33-34
- 结论34-35
- 参考文献35-37
- 附录 综述 神经胶质瘤的基因治疗研究进展37-45
- 参考文献43-45
- 致谢45-46
- 作者简介46
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
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，本文编号：619768
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